Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 10

Kompleks receptora glukokortykoidu (GR) -C / EBP. i jego funkcja antyproliferacyjna w komórkach mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą. Panel A pokazuje reprezentatywny test przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej ekstraktów jądrowych komórek mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą, które przejściowo transfekowano przez 24 godziny (linia 1) lub 48 godzin (linia 2) za pomocą wektora ekspresyjnego C / EBP. i inkubowano dla ostatnie 3 godziny z 10-8 M budezonidem. Ścieżka 3 pokazuje wektor C / EBP. z 10 razy większą niż normalna ilość nieznakowanego oligonukleotydu CCAAT, pusty wektor kontrolny linii, wektor ścieżki 5C / EBP. z przeciwciałem przeciwko C / EBP., pusty wektor kontrolny linii 6 z przeciwciałem przeciwko C / EBP., ścieżka 7 wektor C / EBP. z przeciwciałem przeciwko c-Fos / AP-1, wektor ścieżki 8C / EBP. z przeciwciałem przeciwko GR i pusty wektor kontrolny dla ścieżki 9 z przeciwciałem przeciwko GR. Panel B pokazuje reprezentatywną analizę immunoblot białek GR i C / EBP. w komórkach mięśni gładkich oskrzeli stymulowanych budesonidem przez 0, lub 3 godziny od dwóch osobników bez astmy i dwóch z astmą w obecności i nieobecności stanów nieustalonych (24- godzinę) transfekcji wektorem ekspresyjnym C / EBP. (1 ng na mikrolitr); rec oznacza rekombinant. Panel C pokazuje wpływ transfekcji wektorem ekspresyjnym C / EBP. na proliferację komórek mięśni gładkich oskrzeli od czterech osobników z astmą. Komórki transfekowano wektorem ekspresyjnym C / EBP. (1 ng na mikrolitr) przez 24 godziny w obecności 5 procent płodowej surowicy cielęcej (FCS) lub 10-8 M budezonidu, a pusty wektor zastosowano jako kontrolę. Słupki oznaczają średnie + SE, a każda linia komórkowa została przetestowana w dwóch powtórzeniach. W celu dalszej oceny roli C / EBP. w komórkach mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą, przejściowo transfekowano kultury zbiegające się z wektorem ekspresyjnym dla ludzkiego C / EBP. lub pustego wektora jako kontrolą (Figura 5A). Poziom białka C / EBP. w ekstraktach jądrowych komórek mięśni gładkich oskrzeli od osób z astmą zwiększył się w ciągu 48 godzin w obecności budezonidu (Figura 5A, ścieżki i 2), preinkubacja z 10-krotnością normalnego poziomu nieznakowanego CCAAT oligonukleotyd zmniejszył sygnał (figura 5A, ścieżka 3) i nie zaobserwowano sygnału, gdy komórki transfekowano pustym wektorem kontrolnym przez 48 godzin (figura 5A, ścieżka 4). Gdy ekstrakt był następnie inkubowany z przeciwciałami specyficznymi dla C / EBP., migracja pasma DNA-białka była opóźniona (Figura 5A, ścieżka 5), podczas gdy nie było sygnału, gdy komórki były transfekowane pustym wektorem kontrolnym (Figura 5A, ścieżka 6). Nie zaobserwowaliśmy supersviftów, gdy te same ekstrakty były inkubowane w obecności przeciwciał przeciwko c-Fos / AP-1 (Figura 5A, ścieżka 7), podczas gdy supershift obserwowano w obecności przeciwciał przeciwko receptorowi glukokortykoidowemu (Figura 5A, ścieżka 8). ). Komórki mięśni gładkich oskrzeli transfekowane pustym wektorem nie wykazały supershift w obecności przeciwciał przeciwko receptorowi glukokortykoidowemu (Figura 5A, ścieżka 9).
W celu zbadania, czy w astmatycznych komórkach mięśni gładkich oskrzeli od osobników z astmą, przejściowa transfekcja ludzkim wektorem ekspresyjnym C / EBP. ponownie ustanowiła kompleks glukokortykoidowy receptora C / EBP., uprzednio odnotowany w komórkach mięśni gładkich oskrzeli u osobników bez astmy. , 25, 26 przeprowadziliśmy eksperymenty koimmunoprecypitacji z użyciem ekstraktów jądrowych komórek mięśni gładkich oskrzeli, które inkubowano z 10-8 M budezonidem przez trzy godziny (Figura 5B)
[przypisy: anakinra, disulfiram, dronedaron ]
[patrz też: tęgoryjec objawy, fibrynoliza, olejek pichtowy zastosowanie ]