Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 11

Analiza metodą Western blot koimmunoprecypitatów wykazała wyraźne pasmo dla C / EBP., gdy stosowano przeciwciało przeciwko receptorowi glukokortykoidowemu do immunoprecypitacji i dla receptora glukokortykoidowego, gdy użyto przeciwciała przeciw C / EBP-.. Przeciwnie, nietransfekowane komórki mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą nie wykazały żadnego sygnału ani dla C / EBP., ani dla receptora glukokortykoidowego. Jednakże, gdy te komórki mięśni gładkich oskrzeli transfekowano ludzkim wektorem ekspresyjnym C / EBP. 48 godzin przed stymulacją budezonidem i ekstrakty jądrowe przygotowano 3 godziny po dodaniu leku, a następnie koimmunoprecypitacji, obserwowaliśmy pasmo dla C / EBP. gdy użyto przeciwciała przeciw receptorowi glukokortykoidowemu, a także pasma dla receptora, gdy użyto przeciwciała przeciw C / EBP. (Figura 5B). Uzyskaliśmy dalsze dowody funkcji transfekowanego wektora ekspresyjnego C / EBP. w komórkach mięśni gładkich oskrzeli od osobników z astmą przez zliczanie komórek. Liczba komórek w pięciu takich nietransfekowanych liniach komórkowych podwoiła się w ciągu trzech dni w obecności 5 procent płodowej surowicy cielęcej, a codzienne leczenie budezonidem (10-8 M) nie zmieniło znacząco wzrostu komórek (Figura 5C). Przejściowa transfekcja wektorem ekspresyjnym dla ludzkiego C / EBP. znacznie spowolniła proliferację komórek mięśni gładkich w obecności surowicy płodowo-cielęcej (o 30 . 4,9 procent, P <0,01 w niesparowanym teście ucznia), na podstawie wzrostu liczby komórek od dnia do dnia 3 w obecności 5 procent płodowej surowicy cielęcej. Transfekcja pustym wektorem nie hamowała proliferacji. Przeciwnie, transfekowane komórki traktowane codziennie 10-8 M budezonidem miały dalszą redukcję proliferacji, w porównaniu z transfekowanymi komórkami, które nie były traktowane budezonidem (Figura 5C). Dodatkowy efekt glukokortykoidu na hamujący wpływ wektora ekspresyjnego C / EBP. był znaczący (P <0,01) w komórkach mięśni gładkich oskrzeli od pięciu osobników z astmą i był znacząco różny (P <0,01) od efektu uzyskanego Sam wektor C / EBP.. Obecność pustego wektora razem z budezonidem nie hamowała proliferacji komórek mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą.
Dyskusja
Nasze dane wskazują, że proliferacja komórek mięśni gładkich dróg oddechowych u pacjentów z astmą może wynikać z braku C / EBP.. Brak C / EBP. Wyjaśnia również, dlaczego antyproliferacyjne działanie glukokortykoidów na te komórki było nieobecne, podczas gdy indukowana przez glukokortykoidy supresja interleukiny-6 nie ulegała zmianie. Ponieważ limfocyty krwi obwodowej mają prawidłowy poziom C / EBP., proponujemy, że brak C / EBP-. jest specyficzny dla komórek.
Przerost i rozrost są charakterystyczne dla wiązek mięśni gładkich oskrzeli w astmatycznych drogach oddechowych, a ta zwiększona warstwa mięśni gładkich oskrzeli może tłumaczyć nadreaktywność oskrzeli astmatycznych.1,2,4 Może to również wyjaśniać lokalną rekrutację komórek immunokompetentnych do gładkiej mięśni, co prowadzi do przewlekłego stanu zapalnego.1,2,4 Glukokortykoidy są silnymi supresorami tego przewlekłego stanu zapalnego i stanowią podstawę leczenia astmy umiarkowanej i ciężkiej.
Upośledzona ekspresja receptora glukokortykoidowego lub mutacja w nim była powiązana z astmą, ale nigdy nie udowodniono, że odgrywa ona rolę sprawczą. 30-32 Zakładano, że ekspresja receptora jest wadliwa u pacjentów z astmą, ale nie ma znaczących różnic pomiędzy pacjentami z astmą i bez astmy znaleziono w tkankowej dystrybucji receptora glukokortykoidowego w próbkach z biopsji płucnej. 32 Niektóre dane sugerują, że receptor ma dwie izoformy, . i ., wynikające z różnicowego składania tego samego informacyjnego RNA .33 Obie izoformy wiążą się z tą samą sekwencją konsensusową DNA
[podobne: disulfiram, hurtownia portfeli, klimakterium ]
[więcej w: teczowa kraina, oksyhemoglobina, solanka zabłocka ]