Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 6

Podobne przebiegi czasowe zaobserwowano dla deksametazonu, prednizolonu i hydrokortyzonu w stężeniach w zakresie od 10-9 do 10-6 M. Jak podsumowano na ryc. 1B, przebieg czasowy aktywacji receptora glukokortykoidowego przez budezonid był podobny między mięśniami gładkimi oskrzeli linie komórkowe od 10 kontrolnych, 8 osobników z rozedmą płuc i 12 osobników z astmą, a przebieg czasowy gromadzenia receptorów glukokortykoidowych w jądrze był podobny dla wszystkich czterech glukokortykoidów, bez znaczących różnic w skuteczności (dane nie przedstawione). Drugi, niewielki prążek pojawił się wkrótce po leczeniu glikokortykosteroidami (ryc. 1A). Pasmo to może reprezentować izoformę . receptora glukokortykoidowego, ale stanowi jedynie niewielką część całości. Aktywacja receptora glukokortykoidowego przez glukokortykoidy i jego wiązanie z oligonukleotydem reagującym na glukokortykoidy zostały potwierdzone przez testy przesunięcia elektroforetycznego w komórkach mięśni gładkich oskrzeli od osób z astmą (Figura 1C) i osób bez astmy (Figura 1D). Podobne wyniki uzyskano we wszystkich innych liniach komórek mięśni gładkich oskrzeli (sześć linii komórek astmy i sześć linii komórek nonasthma).
Figura 2. Figura 2. Wpływ glukokortykoidów na indukowane przez surowicę wydzielanie interleukiny-6. W Panelu A komórki mięśni gładkich oskrzeli stymulowano 5% płodową surowicą cielęcą (FCS) przez 24 godziny w monoterapii iw połączeniu z glukokortykoidem, a poziomy interleukiny 6 w pożywce do hodowli komórkowej określano za pomocą testu ELISA. Słupki reprezentują wartości średnie (+ SE) w komórkach mięśni gładkich oskrzeli od 10 osób z astmą i 10 bez astmy. Panel B pokazuje reprezentatywną immunoblotę przebiegu w czasie indukowanej surowicą ekspresji białka C / EBP. W komórkach mięśni gładkich oskrzeli od osobnika bez astmy i jego hamowania przez przejściową transfekcję antysensownym oligonukleotydem 1,0. M C / EBP .. W panelu C wstępne traktowanie komórek przez godzinę za pomocą 10-7 M mifepristonu zasadniczo zmniejszyło działanie hamujące glukokortykoidów na indukowane surowicą wydzielanie interleukiny-6, podczas gdy wstępne traktowanie antysensownym oligonukleotydem .M C / EBP. przez 24 godziny nie miało istotnego znaczenia. efekt. Słupki reprezentują średnie wartości (+ SE) w komórkach mięśni gładkich oskrzeli od 10 osób z astmą i 10 kontrolami.
Aby określić działanie przeciwzapalne glukokortykoidów, przeanalizowaliśmy podłoże hodowlane komórek z powyższych doświadczeń pod kątem obecności interleukiny-6. Po dostosowaniu liczby komórek, poziom sekrecji interleukiny 6 indukowanej przez dodanie 5 procent płodowej surowicy cielęcej po 24 i 48 godzinach był podobny między komórkami mięśni gładkich oskrzeli od 10 osobników z astmą i komórkami mięśni gładkich oskrzeli od 10 osób bez astmy (ryc. 2A). Wszystkie glukokortykoidy znacząco hamowały wywoływane przez surowicę wydzielanie interleukiny-6 (P <0,001).
Aby scharakteryzować wpływ hamującego szlaku sygnałowego glukokortykoidów na wydzielanie interleukiny-6, potraktowaliśmy komórki mifeprystonem (10-7 M) lub antysensownym lub sensownym oligonukleotydem C / EBP.. Dodanie 1,0. M antysensownego oligonukleotydu C / EBP. Spowodowało w ciągu 24 godzin obniżenie ekspresji białka C / EBP. Indukowanego przez surowicę w całkowitych ekstraktach komórek białkowych w komórkach mięśni gładkich oskrzeli od osobników bez astmy (Figura 2B).
Gdy komórki poddano wstępnej obróbce przez godzinę za pomocą mifepristonu 10-7 M, hamujący wpływ glukokortykoidów na wydzielanie interleukiny-6 znacznie się zmniejszył (figura 2C).
[więcej w: disulfiram, chloramfenikol, dienogest ]
[podobne: flucofast opinie, goodlookin allegro, hydrocortisonum cena ]