Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 8

Panel A pokazuje cztery immunoblots komórek mięśni gładkich oskrzeli reprezentujących wyniki u 8 osób z rozedmą płuc i 20 osób z astmą. Subkonfluentne hodowle komórek mięśni gładkich oskrzeli inkubowano z 0,1% płodową surowicą cielęcą (FCS) przez 24 godziny, a następnie stymulowano 5% FCS. Ekspresję C / EBP. określono w całkowitych lizatach komórkowych. Panel B pokazuje reprezentatywne immunobloty ekspresji C / EBP. w ekstrakcie białka całkowitego wyizolowanym z limfocytów krwi obwodowej u czterech pacjentów z astmą i czterech bez astmy. Panel C pokazuje reprezentatywne immunobloty ekspresji C / EBP. w komórkach mięśni gładkich oskrzeli od trzech osobników z astmą przejściowo transfekowanych wektorem ekspresyjnym zawierającym komplementarny DNA kodujący C / EBP. pochodzącą z limfocytów krwi obwodowej człowieka. Komórki przejściowo transfekowano w obecności 5% FCS z ng DNA wektora ekspresyjnego C / EBP. na mikrolitr przez 24 i 48 godzin. Panel D pokazuje skuteczność przejściowej transfekcji na immunofluorescencji. Strzałki wskazują komórki, które wyrażają zielone białko fluorescencyjne, a zatem zostały pomyślnie transfekowane. Panel E pokazuje reprezentatywny test przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej białek wiążących promotor p21 (Waf1 / Cip1) z użyciem ekstraktów jądrowych z komórek mięśni gładkich oskrzeli traktowanych przez trzy godziny 10-8 M budezonidem. Ścieżka pokazuje sam fragment promotora p21 (Waf1 / Cip1), ścieżkę 2 promotor ekstraktami jądrowymi traktowanych budezonem komórek mięśni gładkich oskrzeli od osobników bez astmy, ścieżkę 3 taki sam ekstrakt jak w ścieżce 2, ale z 10 razy normalnym ilość zimnych oligonukleotydów CCAAT, przeciwciało 4 ścieżki przeciw C / EBP. i ekstrakty jądrowe komórek mięśni gładkich oskrzeli od osobników bez astmy, przeciwciało 5 ścieżki przeciw C / EBP. i ekstrakty jądrowe komórek mięśni gładkich oskrzeli od osobników z astmą, ścieżka 6 przeciwciało przeciw receptorowi glukokortykoidowemu (GR) i ekstrakty jądrowe z komórek mięśni gładkich oskrzeli od osób bez astmy, przeciwciało 7 linii przeciw GR i ekstrakty jądrowe komórek mięśni gładkich oskrzeli od osób z astmą, przeciwciało 8 przeciw c-Fos / AP -1 i ekstrakty jądrowe komórek mięśni gładkich oskrzeli u osobników bez astmy i przeciwciało 9 przeciw c-Fos / AP-1 i jądrowe ekstrakty komórek mięśni gładkich oskrzeli od osób z astmą oskrzelową hma. Biorąc pod uwagę nasze poprzednie wyniki, 25, 26 ocenialiśmy rolę C / EBP. w hamowanej przez glukokortykoidy proliferacji komórek mięśni gładkich oskrzeli. Jak pokazano w zestawie reprezentatywnych immunoblotów (Figura 4A), komórki mięśni gładkich oskrzeli od 20 osobników z astmą nie wykazywały ekspresji C / EBP., podczas gdy komórki mięśni gładkich oskrzeli pozbawione surowicy od 8 osobników z rozedmą płuc i 15 osób kontrolnych wyrażały 46 białko -kD C / EBP.. Ekspresja C / EBP. może być indukowana przez 5 procent płodowo-cielęcej surowicy w ciągu 24 godzin we wszystkich komórkach mięśni gładkich oskrzeli od osobników bez astmy (Figura 2B i Figura 4A). Jednak komórki mięśni gładkich oskrzeli od 4 z 20 osobników z astmą wykazywały ekspresję mniejszego białka, które reagowało z przeciwciałem przeciwko przeciwciału C / EBP. (Figura 4A)
[przypisy: przedszkole zielona dolina piła, anakinra, suprasorb ]
[przypisy: vicebrol cena, przedszkole zielona dolina piła, androvit cena ]