Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad

Aktywacja C / EBP. i C / EBP., które są antyproliferacyjnymi czynnikami transkrypcyjnymi, prowadzi do różnicowania komórek.14-17 W przeciwieństwie do C / EBP. i C / EBP. wydaje się napędzać progresję cyklu komórkowego.16-19 form C / EBP. kompleksy z C / EBP. i C / EBP., tym samym modulując ich funkcję.17 C / EBP. to stosunkowo niedawno zidentyfikowana izoforma z różnymi synonimami (np. Ig / EBP i Gadd153) i może odgrywać określoną rolę w funkcji retikulum endoplazmatycznego .17,20 Glukokortykosteroidy spowalniają proliferację komórek mięśni gładkich dróg oddechowych21, zmniejszając ekspresję cykliny D1 i fosforylację białka siatkówczaka22 oraz aktywując p21 (Waf1 / Cip1) .23 W fibroblastach ludzkich płuc i płucnych komórkach mięśni gładkich naczyń i oskrzeli. od pacjentów bez astmy leczenie glukokortykoidami szybko indukuje aktywację receptorów glukokortykoidowych i C / EBP., a następnie ekspresja genu p21 (Waf1 / Cip1) jest szybsza niż przewidywano na podstawie modeli zwierzęcych.23-28 Ponadto aktywacja transkrypcji genu p21 (Waf1 / Cip1) przez glukokortykoidy nie wymagają syntezy C / EBP. z receptorem glukokortykoidów w fibroblastach płucnych, płucnych komórkach mięśni gładkich naczyń lub komórkach mięśni gładkich oskrzeli.25,26 Ze względu na znaczenie leczenia glukokortykoidami w astmie, zbadaliśmy, czy ścieżki opisane powyżej działają w komórkach mięśni gładkich oskrzeli uzyskanych od pacjentów z astmą za. Ponadto ocenialiśmy, czy modulacja uwalniania cytokin przez glukokortykoidy obejmuje tę samą kaskadę sygnalizacyjną w komórkach mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą, jak u osób bez astmy.
Metody
Hodowlę komórkową
Tabela 1. Tabela 1. Charakterystyka 20 osób z astmą, 8 osób z rozedmą płuc i 26 osób z grupy kontrolnej. Pierwotne hodowle komórek mięśni gładkich oskrzeli ustalono na podstawie pakietów mięśni oddechowych uzyskanych od 26 osób kontrolnych (14 pacjentów poddanych resekcji płuca w przypadku nowotworu, 4 pacjentów poddanych transplantacji z powodu mukowiscydozy i 8 osób zdrowych), 8 osób z rozedma płuc i 20 osób z astmą. Komórki hodowano jak opisano uprzednio w minimalnej pożywce minimalnej Dulbecco zawierającej 10% płodowej surowicy cielęcej, 1% minimalnej podstawowej mieszanki witaminowo-witaminowej i 20 mM HEPES3. Charakterystykę osobników zestawiono w Tabeli 1. Wszystkie doświadczenia przeprowadzono między pasażami 3 i 6. Ponadto wyizolowano limfocyty krwi obwodowej z 10 ml krwi od czterech osób z astmą i czterech kontroli zgodnie ze standardowymi procedurami za pomocą gradientu Ficoll.25
Zatwierdzenie eksperymentów dostarczyła komisja ds. Etyki ludzkiej na Uniwersytecie w Sydney i przez Central Health Area w Sydney. Wszyscy pacjenci wyrazili pisemną świadomą zgodę.
Liczenie komórek i synteza DNA
Komórki wysiano z gęstością 104 komórek na centymetr kwadratowy w 24-dołkowych płytkach do hodowli komórkowej w pożywce wzrostowej (minimalna pożywka Dulbecco zawierająca 5 procent surowicy płodowej-cielęcej) przez 24 godziny dla umożliwienia przylegania. Pożywkę zastąpiono pożywką o niskim stężeniu (minimalna pożywka Dulbecco zawierająca 0,1% surowicy płodowej) przez jeden dzień, a następnie wymieniono na pożywkę wzrostową, z pojedynczą lub wielokrotną dawką budezonidu, deksametazonu, prednizolonu lub hydrokortyzonu ( 10-12 do 10-8 M)
[przypisy: ceftriakson, psycholog dziecięcy piła, ambrisentan ]
[przypisy: oksydaza ksantynowa, xyzal opinie, psycholog dziecięcy piła ]