Izolacja lipoprotein o wysokiej gęstości z komórek nabłonka jelitowego szczura.

Wcześniejsze badania określiły formy lipoprotein o dużej gęstości (HDL) w szczurzowej limfie krezkowej, sugerując, że mają one wydzielnicze pochodzenie. Badanie to opisuje izolację i charakterystykę wewnątrzkomórkowego HDL jelit. Wykonano dwa preparaty w następujący sposób: (a) wyizolowano enterocyty szczura i przygotowano frakcję organelli Golgiego. (b) Homogenaty komórkowe poddano kawitacji azotem i przygotowano frakcję cytoplazmatyczną. Lipoproteiny izolowano z obu preparatów przez sekwencyjne ultrawirowanie. Gdy frakcję HDL (1,07-1,21 g / ml) poddano ultrawirowaniu z gradientem gęstości izotopowej, stwierdzono, że pik apoprotein AI i B (odpowiednio apoA-I i apoB) przy gęstości 1,11-1,14 g / ml. Mikroskopia elektronowa frakcji wykazała sferyczne cząstki w zakresie od 6 do 13 nm. Immunoelektroforeza ujawniła łuk strobilitowy w regionie alfa przeciwko apoA-I, który rozszerzył się do regionu pre-beta, w którym zaobserwowano również strititynę przeciwko apoB. Immunofilia ApoB zubożyła cząstki pre-beta, podczas gdy cząsteczki migrujące alfa pozostały. Analiza lipidowa całej frakcji HDL ujawniła fosfolipidy, ester cholesterolu i triglicerydy jako główne lipidy. [3H] leucynę podawano następnie do dwunastnicy i izolowano wyznakowaną radioaktywnie wewnątrzkomórkową frakcję HDL. Nowo syntetyzowane apoproteiny frakcji HDL, określone za pomocą elektroforezy żelowej, to apoB, apoA-I i apolipoproteina A-IV (ApoA-IV). Immunoprecypitacja cząstek apoB ujawniła apoA-I i apoA-IV w supernatancie. Dane te wykazują, że istnieją co najmniej dwie wewnątrzkomórkowe postacie jelitowe cząstek HDL, z których jedna zawiera apoB. Druga cząstka zawiera apoA-I i apoA-IV, ma ruchliwość alfa, jest sferyczna i przypomina cząsteczkę znajdującą się w limfie.
[hasła pokrewne: oksyhemoglobina, olejek pichtowy zastosowanie, remifemin opinie ]