Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML

Postęp przewlekłej białaczki szpikowej (CML) do przełomu blastycznego wspierają samoodnawiające się białaczkowe komórki macierzyste. W normalnych hematopoetycznych komórkach macierzystych myszy, proces samoodnowy obejmuje szlak sygnalizacji .-kateniny. Zbadaliśmy, czy białkowe komórki macierzyste w CML również wykorzystują szlak .-kateniny do samoodnowy. Metody
Zastosowaliśmy sortowanie komórek aktywowane fluorescencją w celu wyizolowania hematopoetycznych komórek macierzystych, wspólnych progenitorów szpikowych, progenitorów granulocytów i makrofagów oraz progenitorów erytroidalnych megakariocytów ze szpiku podczas kilku faz CML i od normalnego szpiku. BCR-ABL, .-katenina i transkrypty LEF-1 porównano za pomocą ilościowego testu odwrotnej transkryptazy-reakcji łańcuchowej polimerazy w normalnych i hematopoetycznych komórkach macierzystych CML i progenitorach granulocytów i makrofagów. Continue reading „Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML”

Wyniki alergii na użądlenia przez owady u dzieci, zi bez Immunoterapii Jodników ad 7

Ogólnoustrojowe reakcje alergiczne zgłaszane przez pacjentów w tych badaniach były łagodne w jednym przypadku, a umiarkowane w trzech przypadkach, a żadne nie były ciężkie. Istnieją dwa doniesienia o długoterminowym wyniku po zaprzestaniu immunoterapii jadów. Lerch i Muller opisali 200 pacjentów w wieku od 11 do 78 lat, którzy mieli łącznie 123 użądlenia w ciągu pięciu do siedmiu lat po zakończeniu leczenia, a wśród nich wskaźnik reakcji wynosił 12 procent. Opisaliśmy 50 dorosłych, którzy zostali ukąszeni w ciągu 5 lat. 13 lat (średnia, 9) po zaprzestaniu immunoterapii jadem, u których szybkość reakcji wynosiła 10 procent9. Continue reading „Wyniki alergii na użądlenia przez owady u dzieci, zi bez Immunoterapii Jodników ad 7”

Wyniki alergii na użądlenia przez owady u dzieci, zi bez Immunoterapii Jodników ad 6

Znacznie mniejszy odsetek reakcji wśród leczonych dzieci, nawet 10 do 20 lat po zakończeniu leczenia, dostarcza pewnych dowodów na długotrwałe działanie immunomodulacyjne immunoterapii alergenowej u dzieci. Współczynnik nawrotów wynoszący 5% wśród dzieci leczonych był niższy niż wśród dorosłych, u których odsetek ten był ponad trzykrotnie większy.Od porównania z dorosłymi również wynika, że istnieje mniej powodów, aby kontynuować immunoterapię na jady u dzieci w wieku powyżej trzech lat. do pięciu lat, dzięki przedłużonemu zmniejszeniu ryzyka po leczeniu. Dzieci, które miały nawrót po leczeniu, początkowo miały umiarkowane do ciężkich reakcje – odkrycie sugerujące, że aktualne wytyczne zalecające, aby osoby dorosłe z ciężkimi reakcjami w przeszłości miały przedłużoną immunoterapię na jad, mogą dotyczyć również dzieci.
Nasilenie początkowej reakcji ma szczególną wartość prognostyczną u dzieci, tak jak u dorosłych. Continue reading „Wyniki alergii na użądlenia przez owady u dzieci, zi bez Immunoterapii Jodników ad 6”

Wyniki alergii na użądlenia przez owady u dzieci, zi bez Immunoterapii Jodników ad 5

Wśród pacjentów z umiarkowanymi lub ciężkimi ogólnoustrojowymi reakcjami alergicznymi tylko 2 z 43 pacjentów (5 procent) miało następczą ogólnoustrojową reakcję alergiczną – częstość reakcji niższą niż u nieleczonych pacjentów (p = 0,007) (tabela 3) . Wśród pacjentów z łagodnymi (skórnymi) ogólnoustrojowymi reakcjami alergicznymi w wywiadzie, którzy nie otrzymywali immunoterapii jadowej, szybkość reakcji była zerowa, co nie różniło się znacząco od względnie niskiej szybkości reakcji wśród nieleczonych pacjentów (P = 0,12) (Tabela 3). ). Porównano nasilenie reakcji na ostatnie użądlenia owadów z reakcją pierwotną 10 do 20 lat wcześniej wśród pacjentów w badaniu. Wśród osób z układowymi reakcjami alergicznymi o nasileniu od umiarkowanego do ciężkiego, u 15 z 22 pacjentów (68 procent), którzy nie otrzymywali immunoterapii na obecność jadu i ostatnio otrzymywali użądlenia, nie wystąpiły ogólnoustrojowe reakcje alergiczne, u pacjenta wystąpiło mniej ogólnoustrojowa reakcja alergiczna, u 6 ogólnoustrojowe reakcje alergiczne były podobne do pierwotnych reakcji iw żadnej z nich reakcja nie była gorsza niż wcześniej. Continue reading „Wyniki alergii na użądlenia przez owady u dzieci, zi bez Immunoterapii Jodników ad 5”

Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML ad 7

Po trzecie, szlak P-kateniny został aktywowany w progenitorach granulocytów i makrofagów od pacjentów z CML w fazie przyspieszonej oraz od pacjentów z CML w czasie przełomu blastycznego, a także u pacjentów z CML oporną na imatynib. Po czwarte, progenitory granulocytów i makrofagów w CML mają zdolność samoodnawiania, przynajmniej in vitro, chociaż nasze dane nie wykluczają możliwości, że ta zdolność może być bardziej ograniczona niż w przypadku normalnych hematopoetycznych komórek macierzystych in vivo. Po piąte, odnowa mediatorów .-kateninowych progenitorów granulocytów i makrofagów w CML może zostać zahamowana przez wymuszoną ekspresję aksyny – silnego i wysoce swoistego antagonisty .-kateniny. Figura 5. Figura 5. Continue reading „Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML ad 7”

Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML ad 6

Panel B pokazuje wydajność replikacji poszczególnych kolonii pochodzących z hematopoetycznych komórek macierzystych (HSC) i progenitorów granulocytów i makrofagów (GMP) od trzech osobników kontrolnych w obecności lub przy braku wymuszonej lentiwirusowo ekspresji aksyny i .-kateniny. Panel C pokazuje wydajność replikacji pojedynczych kolonii pochodzących z hematopoetycznych komórek macierzystych i progenitorów granulocytów-makrofagów z trzech kontroli i trzech pacjentów z CML przed i po transdukcji z lentiwirusowym wektorem aksonu-GFP.1 Ocenialiśmy, czy progenitory granulocytów i makrofagów w CML uzyskały wysoki potencjał proliferacyjny i zdolność samoodnawiania hematopoetycznych komórek macierzystych w wyniku aktywacji .-kateniny. 27-32 komórki CD34 + Lin od pacjentów z CML w fazie akceleracji, które uległy transdukcji z lentiwirusową p-kateniną tworzyły się kolonie, które były większe niż normalnie, podczas gdy transdukcja komórek aksyną zmniejszała wielkość kolonii (Figura 4A i Figura 5 w Dodatku Uzupełniającym). Ponadto, wymuszona ekspresja .-kateniny dostarczyła normalnych progenitorów granulocytów-makrofagów z samoodnawiającą się zdolnością w teście replikacji (Figura 4B). Szczepy progenitorowe granulocytów i makrofagów CML, ale nie będące normalnymi progenitorami granulocytów i makrofagów, miały wysoką zdolność do replikacji i zachowały zdolność do tworzenia kolonii mieloidalnych w testach komórek tworzących kolonie (Figura 4C). Continue reading „Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML ad 6”

Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML ad 5

Panel C pokazuje lokalizację .-kateniny w hematopoetycznych komórkach macierzystych reprezentujących CML oporne na imatynib, progenitory granulocytów i makrofagów reprezentujące CML oporne na imatynib i kontrolę izotypową. Histogramy na panelu D pokazują względny odsetek komórek z ekspresją reportera białek zielonej fluorescencji LEF / TCF (GFP) w hematopoetycznych komórkach macierzystych i progenitorach granulocytów-makrofagów od kontroli i pacjentów z CML w czasie przełomu blastycznego. W histogramie po prawej, nieprzetłumaczone komórki progenitorowe granulocytów i makrofagów od pacjenta z CML w przełomie blastycznym zastosowano jako kontrolę (zielony). Analiza FACS wykazała, że całkowity wewnątrzkomórkowy poziom .-kateniny w hematopoetycznych komórkach macierzystych nie różnił się istotnie pomiędzy grupami kontrolnymi i pacjentami z CML na którymkolwiek etapie choroby. Natomiast mieloidalne komórki progenitorowe od pacjentów z CML w fazie przyspieszonej lub przełomie blastycznym miały zwiększone poziomy .-kateniny w porównaniu z poziomami w kontrolach (Figura 2A). Continue reading „Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML ad 5”

Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML czesc 4

Wśród komórek od pacjentów z odpowiedzią na imatynib wystąpił znaczny spadek liczby komórek Lin CD34 + w porównaniu do ich prawidłowych odpowiedników w szpiku kostnym (P = 0,03), a odsetek poszczególnych progenitorów mieloidalnych powrócił do normy, podczas gdy próbki od pacjentów z CML odpornymi na imatynib miały zwiększoną liczbę progenitorów granulocytów i makrofagów (ryc. 1A i 1C w dodatkowym dodatku). Ilościowa analiza RT-PCR wykazała, że w próbkach od pacjentów z CML w fazie przewlekłej transkrypty BCR-ABL były bardziej obfite w hematopoetycznych komórkach macierzystych niż w progenitorach szpikowych. Odwrotnie, przełom blastyczny był związany ze zwiększoną liczbą transkryptów BCR-ABL w progenitorach szpikowych, szczególnie wspólnych progenitorów szpikowych i progenitorów granulocytów i makrofagów (Figura 1C). Ze względu na małą liczbę progenitorów, które udało nam się uzyskać z próbek pobranych z banków, przeprowadziliśmy analizę RT-PCR dla BCR-ABL zamiast fluorescencyjnej hybrydyzacji in situ. Continue reading „Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML czesc 4”

Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML cd

Obrazy konfokalne uzyskano przy użyciu konfokalnego mikroskopu fluorescencyjnego o podwójnej fotonie (model LSM510, Zeiss) przy powiększeniu 100x, a obrazy trójwymiarowe wykonano za pomocą oprogramowania Volocity (opisane w Metodzie 3 Dodatkowego Dodatku ). Test Reportera LEF / TCF
Lentiwirusowy reporter LEF / TCF (Figura Dodatkowego Dodatku) został użyty do oceny zdolności .-kateniny do aktywacji transkrypcji za pomocą LEF / TCF w posortowanych populacjach normalnych i hematopoetycznych komórek macierzystych CML i mieloidalnych komórek progenitorowych, zasadniczo jak poprzednio. opisano, z substytucją ludzkich cytokin interleukina-6 (10 ng na mililitr), ligand Flt3 (50 ng na mililitr), współczynnik stali (50 ng na mililitr) i trombopoetynę (10 ng na mililitr) .7,57
Wyniki
Hematopoietic Stem Cells and Progenitor Cells in CML
Ryc. 1. Ryc. Continue reading „Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML cd”

Zaawansowane wsparcie życia sercowego w pozaszpitalnym zatrzymaniu krążenia ad 5

Dobroć dopasowania do modelu wyniosła 6,4 (P = 0,60) i została oceniona za pomocą testu Hosmera-Lemeshowa. Można założyć rozsądne dopasowanie, ponieważ wynik nie był znaczący. Powierzchnia pod krzywą charakterystyki pracy odbiornika wynosiła 0,77, co wskazuje na poprawność modelu (wartość 1,0 oznacza 100% specyficzności i czułości). Ilości szans, określone po analizie logistyczno-regresyjnej, dotyczą czynników związanych z przeżyciem do wypisu ze szpitala. CI oznacza przedział ufności. Continue reading „Zaawansowane wsparcie życia sercowego w pozaszpitalnym zatrzymaniu krążenia ad 5”