Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML ad 5

Panel C pokazuje lokalizację .-kateniny w hematopoetycznych komórkach macierzystych reprezentujących CML oporne na imatynib, progenitory granulocytów i makrofagów reprezentujące CML oporne na imatynib i kontrolę izotypową. Histogramy na panelu D pokazują względny odsetek komórek z ekspresją reportera białek zielonej fluorescencji LEF / TCF (GFP) w hematopoetycznych komórkach macierzystych i progenitorach granulocytów-makrofagów od kontroli i pacjentów z CML w czasie przełomu blastycznego. W histogramie po prawej, nieprzetłumaczone komórki progenitorowe granulocytów i makrofagów od pacjenta z CML w przełomie blastycznym zastosowano jako kontrolę (zielony). Analiza FACS wykazała, że całkowity wewnątrzkomórkowy poziom .-kateniny w hematopoetycznych komórkach macierzystych nie różnił się istotnie pomiędzy grupami kontrolnymi i pacjentami z CML na którymkolwiek etapie choroby. Natomiast mieloidalne komórki progenitorowe od pacjentów z CML w fazie przyspieszonej lub przełomie blastycznym miały zwiększone poziomy .-kateniny w porównaniu z poziomami w kontrolach (Figura 2A). Poziomy te normalizowały się u pacjentów, którzy otrzymywali imatynib (Figura 2B). W przypadku braku fosforylacji aktywowana .-katenina przemieszcza się do jądra (Figura 2 w Dodatku Uzupełniającym). Konfokalna mikroskopia fluorescencyjna z monoklonalnymi przeciwciałami przeciw niefosforylowanej .-kateninie wykazała, że intensywność barwienia jądrowej .-kateniny była podobna w hematopoetycznych komórkach macierzystych od kontroli, pacjentów z CML w fazie akceleracji i pacjentów z CML w czasie przełomu blastycznego. Jednakże wystąpił uderzający wzrost aktywowanej .-kateniny w progenitorach granulocytów i makrofagów od pacjentów w przełomie blastycznym (Figura 3B) lub tych, którzy mieli CML oporną na imatynib, w porównaniu z takimi progenitorami z normalnego szpiku (Figura 3C). Zgodnie, test reportera LEF / TCF-GFP aktywacji transkrypcyjnej z udziałem. -Kateniny ujawnił podobne poziomy GFP w hematopoetycznych komórkach macierzystych od kontroli, pacjentów z CML w fazie przewlekłej (nie pokazano) i pacjentów z CML w czasie przełomu blastycznego, ale wzrost GFP – a tym samym jądrowej .-kateniny – w progenitorach granulocytów i makrofagów od pacjentów w fazie przełomu blastycznego (ryc. 3D). Ponadto, kolonie pochodzące z komórek CD34 + Lin- z przełomem blastycznym, które były transdukowane przez reporter LEF / TCF-GFP, miały wyższe poziomy GFP niż ich normalne odpowiedniki (Figura 3 w Dodatku Aneks). Podczas gdy normalne komórki progenitorowe granulocytów i makrofagów miały zmniejszoną ekspresję .-kateniny lub jej koaktywatora transkrypcyjnego, LEF-1, w porównaniu z normalnymi hematopoetycznymi komórkami macierzystymi, progenitory granulocytów i makrofagów CML od pacjentów w ostrym kryzysie wykazywały zwiększony poziom obu transkryptów (Figura 4 w Dodatek dodatkowy), który najprawdopodobniej przyczynił się do nuklearnej akumulacji .-kateniny.
Odnawianie własne CML Granulocyte-Macrophage Progenitors
Ryc. 4. Ryc. 4. Fotomikrografie fazowo-kontrastowe (panel A) i zastępowanie wydajności ogniw (panele B i C). Panel A pokazuje fotomikrografie z fazą kontrastu kolonii nietransdukowanych CML o fazie przyspieszonej, kolonie pochodzące z komórek transdukowanych wewnętrznym miejscem wiązania rybosomu .-kateniny w białku fluorescencyjnym z zielonym RNA (GFP) i koloniach pochodzących z komórek transdukowanych z aksynem-IRES-GFP
[podobne: Mimośród, Enterolalemtuzumab, dekstrometorfan ]
[więcej w: vicebrol cena, przedszkole zielona dolina piła, androvit cena ]