Prolimery granulokocytów-makrofagów jako kandydaci na komórki białaczkowe w chorobie Blast-Crisis CML

Postęp przewlekłej białaczki szpikowej (CML) do przełomu blastycznego wspierają samoodnawiające się białaczkowe komórki macierzyste. W normalnych hematopoetycznych komórkach macierzystych myszy, proces samoodnowy obejmuje szlak sygnalizacji .-kateniny. Zbadaliśmy, czy białkowe komórki macierzyste w CML również wykorzystują szlak .-kateniny do samoodnowy. Metody
Zastosowaliśmy sortowanie komórek aktywowane fluorescencją w celu wyizolowania hematopoetycznych komórek macierzystych, wspólnych progenitorów szpikowych, progenitorów granulocytów i makrofagów oraz progenitorów erytroidalnych megakariocytów ze szpiku podczas kilku faz CML i od normalnego szpiku. BCR-ABL, .-katenina i transkrypty LEF-1 porównano za pomocą ilościowego testu odwrotnej transkryptazy-reakcji łańcuchowej polimerazy w normalnych i hematopoetycznych komórkach macierzystych CML i progenitorach granulocytów i makrofagów. Do wykrywania jądrowej .-kateniny w tych komórkach zastosowano konfokalną mikroskopię fluorescencyjną i test czynnik limfatyczny / czynnik reporterowy limfocytów T. Testy replikacji in vitro wykorzystano do identyfikacji komórek samoodnawiających się jako kandydujących białaczkowych komórek macierzystych, a zależność samoodnowy w aktywacji .-kateniny badano przez lentiwirusową transdukcję hematopoetycznych komórek progenitorowych za pomocą akseny, inhibitora szlaku .-kateniny.
Wyniki
Granica progenitorowa granulocytów i makrofagów od pacjentów z CML w przebiegu przełomu blastycznego i CML opornego na imatynib została rozszerzona, ulegała ekspresji BCR-ABL i miała podwyższone poziomy jądrowej .-kateniny w porównaniu z poziomami w prekursorach z prawidłowego szpiku. W przeciwieństwie do normalnych progenitorów granulocytów i makrofagów, komórki progenitorowe granulocytów i makrofagów CML tworzyły samoodnawiające, replikowalne kolonie mieloidalne, a zdolność do samoodnawiania in vitro została zmniejszona przez wymuszoną ekspresję aksynu.
Wnioski
Aktywacja .-kateniny w progenitorach granulocytów i makrofagów CML wydaje się zwiększać aktywność samoodnawiania i potencjał białkowy tych komórek.
Wprowadzenie
Chromosom Philadelphia w przewlekłej białaczce szpikowej (CML) powoduje protoonkogen BCR-ABL i jego konstytutywnie aktywną białkową kinazę tyrozynową produkt p210 BCR-ABL. 1-16 BCR-ABL jest ważny, ponieważ u pacjentów z CML występuje klonacja. ekspansja komórek hematopoetycznych, które eksprymują ten gen fuzyjny. Co więcej, ciągła ekspresja BCR-ABL jest wymagana do przedłużonej proliferacji komórek białaczkowych w mysich modelach CML.6-9.
Imatinib, silny inhibitor p210BCR-ABL, może wywołać remisję u pacjentów z CML w fazie przewlekłej, ale pomimo tego zdarzenia komórki szpiku mogą nadal wytwarzać transkrypty BCR-ABL.17,18 U niektórych pacjentów oporność na imatynib rozwija się. w wyniku amplifikacji BCR-ABL lub mutacji w miejscu wiązania p210BCR-ABL dla imatinibu.19,20 W innej białaczce szpikowej, ostra białaczka szpikowa t (8; 21), szpik od pacjentów w pełnej remisji zawiera pozornie prawidłową hematopoetyczną pęd komórki, które produkują transkrypty AML1-ETO. Obecność tych komórek macierzystych podczas remisji sugeruje, że są to komórki preleukemiczne, a nie białaczkowe. (Transkrypty te uczestniczą w rozwoju ostrej białaczki szpikowej, AML1-ETO powstaje w wyniku fuzji części genu AML1 na chromosomie 8 z częścią genu ETO na chromosomie 21.21). Podobnie genomowy BCR-ABL utrzymuje się w szpiku niektórzy pacjenci z CML, którzy są w ciągłej całkowitej remisji cytogenetycznej, 22 i zostały wykryte na bardzo niskich poziomach w leukocytach od osób zdrowych 23, co sugeruje, że preleukemiczne hematopoetyczne komórki macierzyste lub bardziej zróżnicowane komórki progenitorowe potrzebują dodatkowych mutacji dla progresji do jawnej białaczki wystąpić.15,16,24-26
U myszy samo-odnowienie hematopoetycznych komórek macierzystych pociąga za sobą aktywację szlaku .-kateniny, 27,28, co powoduje translokację .-kateniny do jądra, gdzie oddziałuje z limfocytowym czynnikiem wzmacniającym / czynnikiem komórek T (LEF / TCF) czynniki transkrypcyjne i reguluje transkrypcję genów, takich jak c-myc i cyklina D1.29-32 Aktywacja mutacji p-kateniny występuje w wielu rakach nabłonkowych. 33-37. Zdolność do izolowania oczyszczonych populacji krwiotwórczych komórek macierzystych i szpikowych komórek progenitorowych38- 41 umożliwił identyfikację genów zaangażowanych w samo-odnowienie hematopoetycznych komórek macierzystych (zdolność do tworzenia większej liczby komórek potomnych na tym samym etapie różnicowania) .27,28,42-45 Deregulacja ścieżek samoodnawiania, które są normalnie ściśle regulowany w hematopoetycznych komórkach macierzystych, 27,28,39-45 został ostatnio uznany za ważny krok w rozwoju białaczki.46,47 Przeprowadziliśmy badanie w celu zidentyfikowania kandydujących białaczkowych komórek macierzystych13,21,24-26, które są odpowiedzialne za choroba pr ogniskowanie i oporność na imatynib u pacjentów z CML oraz ustalenie, czy te komórki macierzyste nabywają potencjał do samoodnowy poprzez aktywację .-kateniny.29-32
Metody
Próbki szpiku kostnego i krwi obwodowej
Próbki prawidłowego szpiku kostnego (wszystkie komórki) lub krwi obwodowej mobilizowanej przez kolonię granulocytów
[hasła pokrewne: dekstrometorfan, nutrend, hurtownia portfeli ]
[patrz też: teczowa kraina, oksyhemoglobina, solanka zabłocka ]