Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T czesc 4

Komórki stymulowano przez 60 godzin związanym z płytką anty-CD3. (2 .g na mililitr) pod nieobecność lub w obecności rekombinowanego ludzkiego TGF-.1 (5 ng na mililitr), pulsowano .C trytowanej tymidyny na studzienkę przez 12 godzin, i zbierane za pomocą kombajnu do zbierania komórek Brandel. Ilość włączonej [3H] tymidyny zmierzono za pomocą spektrofotometrii scyntylacyjnej (1450 licznika scyntylacyjnego płynu Microbeta, Perkin Elmer). W równoległych seriach eksperymentów obejmujących te same warunki, supernatanty z hodowli komórkowej usunięto po 48 godzinach i zmierzono poziomy interleukiny-2 przy użyciu zestawu do testu immunoenzymatycznego Quantikine M zgodnie z instrukcjami producenta (R & D Systems) . Immunohistochemia
Białka Smad barwiono na 5-mikrometrowych odcinkach utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie mysich tkanek (serce, nerki i węzły chłonne), jak opisano wcześniej, z zastosowaniem automatycznego systemu barwienia komórek Optimax Plus 2.0 z oprogramowaniem badawczym (BioGenex). Continue reading „Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T czesc 4”

Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie czesc 4

Zestawy sond z tym samym symbolem genu zostały policzone jako jeden. Podstawowe dane są dostępne za pośrednictwem GeneExpression Omnibus Narodowego Centrum Informacji Biotechnologicznej pod adresem http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/ (Platforma, GPL91, Sample, GSM9653 do 9934, Series, GSE635 do 660). Dodatkowe informacje dotyczące zastosowanych metod można znaleźć na stronie www.stjuderesearch.org/data/ALL4/ pod adresem www.eur.nl/fgg/kgk/ oraz w dodatkowym dodatku. Wyniki
Ryc. 1. Continue reading „Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie czesc 4”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli cd

Proliferację komórek oceniano po trzech i pięciu dniach leczenia 5% płodową surowicą cielęcą; komórki przemyto dwukrotnie chłodzoną lodem solą fizjologiczną buforowaną fosforanem, a następnie potraktowano trypsyną i EDTA (odpowiednio mM i 0,05 procent) przez jedną minutę. Roztwór trypsyny usunięto, a komórki ponownie zawieszono w 0,5 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanem. Komórki zawarte w 0,01 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanem zliczono w dwóch powtórzeniach dla każdej studzienki za pomocą ulepszonego hemocytometru Neubauera. Włączenie [3H] tymidyny zmierzono zgodnie ze standardowymi protokołami. Komórki przygotowano tak, jak były dla zliczeń komórek, ale hodowano je tylko przez 24 godziny po stymulacji i dodaniu 5 .Ci [3H] tymidyny na mililitr w ciągu ostatnich 6 godzin hodowli. Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli cd”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 10

Kompleks receptora glukokortykoidu (GR) -C / EBP. i jego funkcja antyproliferacyjna w komórkach mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą. Panel A pokazuje reprezentatywny test przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej ekstraktów jądrowych komórek mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą, które przejściowo transfekowano przez 24 godziny (linia 1) lub 48 godzin (linia 2) za pomocą wektora ekspresyjnego C / EBP. i inkubowano dla ostatnie 3 godziny z 10-8 M budezonidem. Ścieżka 3 pokazuje wektor C / EBP. Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 10”

Indukcja ludzkich limfocytów T cytotoksycznych swoistych dla antygenu przez Toxoplasma gondii.

Aby lepiej zrozumieć rolę komórek T w odporności na pasożyta Toxoplasma gondii, wytworzono klony komórek T swoiste wobec antygenu przy użyciu jednojądrzastych komórek krwi obwodowej od osób seropozytywnych. Do stymulacji proliferacyjnej ekspansji komórek reagujących na antygen wykorzystano całe pasożyty, a następnie ograniczono klonowanie rozcieńczeń w obecności napromieniowanych, autologicznych PBMC i rIL-2. Trzy pasożyty specyficzne dla antygenu klony komórek T wyrażające fenotyp CD3 + wybrano do dalszej charakteryzacji. Analiza fenotypowa z przeciwciałami monoklonalnymi ujawniła dwa klony reagujące z CD8 (RTg1 i RTg3), podczas gdy inne (RTg2) fenotypowane jako CD4 +, CD8-. Gdy testowano w teście proliferacji przy użyciu panelu różnych białek T. Continue reading „Indukcja ludzkich limfocytów T cytotoksycznych swoistych dla antygenu przez Toxoplasma gondii.”

Zespół Sjögrena-Larssona. Upośledzenie utleniania alkoholu tłuszczowego w hodowanych fibroblastach z powodu niedoboru alkoholu tłuszczowego: aktywność oksydoreduktazy dinukleotydu nikotynamidoadeninowego.

Metabolizm lipidów badano w hodowlach fibroblastów skóry od pacjentów z wrodzonym zaburzeniem, zespołem Sjögrena-Larssona (SLS). Nienaruszone fibroblasty SLS inkubowane w obecności palmitynianu [1-14C] gromadziły więcej radioaktywnego heksadekanolu niż normalne komórki, podczas gdy włączanie radioaktywności do innych lipidów komórkowych pozostawało niezmienione. Zawartość heksadekanolu w fibroblastach SLS była nienormalnie podwyższona. Kumulacja heksadekanolu nie była spowodowana zwiększoną syntezą alkoholu tłuszczowego ani jego niedostatecznym wykorzystaniem do syntezy eteru glicerolu. Okres półtrwania wewnątrzkomórkowego heksadekanolu wprowadzonego do fibroblastów SLS był zwiększony (70 min) w porównaniu z prawidłowym (15 min), a nienaruszone fibroblasty SLS wykazywały upośledzone utlenianie [14C] -heksadekanolu do kwasu tłuszczowego. Continue reading „Zespół Sjögrena-Larssona. Upośledzenie utleniania alkoholu tłuszczowego w hodowanych fibroblastach z powodu niedoboru alkoholu tłuszczowego: aktywność oksydoreduktazy dinukleotydu nikotynamidoadeninowego.”

Izolacja krążących kompleksów immunologicznych z wykorzystaniem komórek Raji. Separacja antygenów z kompleksów immunologicznych i wytwarzanie antyserum.

Komórki Raji wykorzystano do izolacji kompleksów antygen-przeciwciało wiążące kompleks z surowicy. Kompleksy immunologiczne związane z tymi komórkami znakowano radioaktywnie na powierzchni komórek za pomocą laktoperoksydazy. Kompleksy następnie eluowano z komórek izotonicznym buforem cytrynianowym o pH 3,2 lub odzyskiwano przez immunoprecypitację lizatów komórkowych. Antygen i fragmenty przeciwciał kompleksów izolowano przez dysocjację wirowania w gradiencie gęstości sacharozy lub przez elektroforezę w żelu z dodecylosiarczanem sodu / poliakryloamidem. Różnorodność preformowanych kompleksów immunologicznych została skutecznie wyizolowana z surowicy przy użyciu tego podejścia. Continue reading „Izolacja krążących kompleksów immunologicznych z wykorzystaniem komórek Raji. Separacja antygenów z kompleksów immunologicznych i wytwarzanie antyserum.”

Wpływ hormonu przytarczycznego i mocznicy na prędkość przepływu nerwów obwodowych i szybkość przewodzenia nerwów ruchowych

Neuropatia obwodowa nie jest rzadkim powikłaniem przewlekłej mocznicy. Ponieważ hormon przytarczyczny, zwiększając stężenie wapnia w mózgu, jest częściowo odpowiedzialny za aberracje ośrodkowego układu nerwowego w mocznicy, badaliśmy względną rolę mocznicy jako takiej i (lub) hormonu przytarczyc na wapń nerwów obwodowych i prędkość przewodzenia nerwów ruchowych (MNCV). Badania przeprowadzono w sześciu grupach po sześć psów każda, w następujący sposób: (a) normalne psy, (b) zwierzęta leczone tyrolitycznie tarczycy (T-PTX), (c) psy z 3 dniami mocznicy wytwarzane przez obustronną nefrektomię, (d) PTX przed indukcją ostrej niewydolności nerek, (e) normalne psy otrzymujące 100 j / dzień przytarczyc (PTE) przez 3 dni i (f) normalne zwierzęta otrzymujące 3 dni PTE, a następnie 5 dni bez PTE. Zawartość wapnia w nerwie obwodowym (wyrażona w miligramach na kilogram suchej masy) wynosiła 252. 5 (SE) u zdrowych zwierząt i 262. Continue reading „Wpływ hormonu przytarczycznego i mocznicy na prędkość przepływu nerwów obwodowych i szybkość przewodzenia nerwów ruchowych”

Niedobór czynnika Fletchera. Zmniejszone tempo aktywacji czynnika Hagemana spowodowane przez brak prekallikreiny z zaburzeniami krzepnięcia, fibrynolizą, działaniem chemotaktycznym i generowaniem kininy.

Niedobór czynnika Fletchera w osoczu wykazuje niedobór prekallikreiny i dlatego nie wywołuje on działania bradykininy po aktywacji kaolinem. Ma również zmniejszoną szybkość aktywacji kaolinem i fibrynolizę i wykazuje defekt aktywnej chemotaktycznie kaolinu. Te nieprawidłowości są również korygowane przez rekonstytucję z oczyszczoną prekallikreiną. Dodanie nienaruszonego aktywowanego czynnika Hagemana korygowało defekty krzepnięcia, fibrynolityczne i chemotaktyczne, a dodanie fragmentów czynnika Hagemana korygowało defekt fibrynolityczny i częściowo korygowało defekt chemotaktyczny; żaden z nich nie korygował defektu generującego kininę. Chociaż wydaje się, że szlaki zależne od czynnika Hagemana są inicjowane przez aktywację kontaktową czynnika Hagemana, generowany kalikreina aktywuje więcej czynnika Hagemana; ta informacja zwrotna jest niezbędna, aby ścieżki zależne od czynnika Hagemana mogły przebiegać z normalną szybkością. Continue reading „Niedobór czynnika Fletchera. Zmniejszone tempo aktywacji czynnika Hagemana spowodowane przez brak prekallikreiny z zaburzeniami krzepnięcia, fibrynolizą, działaniem chemotaktycznym i generowaniem kininy.”

Obniżenie ekspresji mdr-1 przez 8-Cl-cAMP w ludzkich komórkach raka sutka MCF-7 opornych na wiele leków.

Sześciokrotne zmniejszenie ekspresji mRNA mdr-1 przez 8-Cl-cAMP rozpoczęło się w ciągu 8 godzin leczenia i było związane ze zmniejszeniem syntezy P-glikoproteiny i ze wzrostem akumulacji winblastyny. Obniżenie ekspresji mdr-1 po leczeniu 8-Cl-cAMP obserwowano również w liniach komórkowych ludzkiego raka jajnika opornych na wiele leków. Wiadomo, że 8-Cl-cAMP zmienia stosunek dwóch podjednostek regulatorowych, RI i RII, kinazy białkowej A (PKA). Zaobserwowaliśmy, że RI alfa zmniejszyło się w ciągu 24 godzin leczenia 8-Cl-cAMP, że RII beta zwiększyło się po zaledwie 3 godzinach leczenia, a aktywność katalityczna PKA pozostała niezmieniona w ciągu 48 godzin leczenia 8-Cl-cAMP. Wyniki są zgodne z hipotezą, że ekspresja mdr-1 jest częściowo regulowana przez zmiany w poziomach izoenzymów PKA. Continue reading „Obniżenie ekspresji mdr-1 przez 8-Cl-cAMP w ludzkich komórkach raka sutka MCF-7 opornych na wiele leków.”