Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T cd

Związane z cykliną D3 kompleksy immunologiczne przemyto trzykrotnie 500 .l buforu RIPA i osad ponownie zawieszono w 30 .l buforu ładującego żel, a następnie ogrzewano w 95 ° C przez pięć minut w celu usunięcia związanych białek z kulek agarozowych. Kompleksy immunologiczne p27Kip1 traktowano w podobny sposób. Obie związane z cykliną D3 i wolne frakcje p27Kip1 rozdzielono za pomocą elektroforezy w żelu z dodecylosiarczanem sodu / poliakryloamidem na żelu TRIS-Glycine Novex (4 do 20 procent), przeniesiono na nitrocelulozę i inkubowano przez noc w 4 ° C z królicze przeciwciało poliklonalne przeciwko ludzkiemu p27Kip1 (sc-528, Santa Cruz Biotech) w rozcieńczeniu 1: 500 w soli fizjologicznej buforowanej TRIS zawierającej 4% mleka beztłuszczowego. Przeciwgrzybicze IgG osy skoniugowane z peroksydazą chrzanową (Amersham) stosowano do wykrywania związanego przeciwciała przeciw p27Kip1 za pomocą chemiluminescencji (system Pierce Super Signal West Pico). Analiza RNA Smad3 Messenger
RNA oczyszczono z próbek komórek białaczki i świeżo izolowanych prawidłowych komórek T krwi obwodowej przy użyciu odczynnika Trizol (Invitrogen) i wszelkie zanieczyszczające genomowe DNA usunięto przez trawienie DNazą RQ1 (Promega). Continue reading „Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T cd”

Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie cd

Tablice pominięto, jeśli współczynnik skalowania przekroczył 3 SD średniej lub jeśli stosunek 3 do 5 informacyjnego RNA dla dehydrogenazy .-aktyny lub dehydrogenazy gliceraldehyd-3 był większy niż 3. Z łącznej liczby 22 283 zestawów sond, te wyrażone w mniej niż pięciu pacjentach zostały pominięte, pozostawiając 14.550 zestawów sond do kolejnych analiz. Dla każdego czynnika antybakteryjnego zidentyfikowaliśmy geny najbardziej dyskryminujące pod względem odporności i czułości, stosując test sumy rang Wilcoxona i test t dla każdego zestawu sond i oszacowano współczynnik fałszywego wykrywania przy użyciu wartości q zgodnie z Storey i Tibshirani. wybraną wartość P (alfa) dla ocenianych genów dyskryminujących (np. P <0,001), ogólne znaczenie szacowanego odsetka fałszywych odkryć obliczono jako prawdopodobieństwo zaobserwowania równych lub niższych wyników fałszywych odkryć na podstawie 1000 losowych permutacji. Continue reading „Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie cd”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad

Aktywacja C / EBP. i C / EBP., które są antyproliferacyjnymi czynnikami transkrypcyjnymi, prowadzi do różnicowania komórek.14-17 W przeciwieństwie do C / EBP. i C / EBP. wydaje się napędzać progresję cyklu komórkowego.16-19 form C / EBP. kompleksy z C / EBP. Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 9

Jednak, aby zwizualizować te mniejsze prążki białek, musieliśmy podwoić czas ekspozycji immunoblotów. Aby określić, czy brak C / EBP. jest cechą patofizjologiczną obecną w komórkach innych niż komórki mięśni gładkich oskrzeli, wyizolowaliśmy limfocyty krwi obwodowej od czterech osób z astmą i czterech bez astmy. Wykryliśmy białko C / EBP. we wszystkich próbkach (Figura 4B). Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 9”

Obniżenie ekspresji mdr-1 przez 8-Cl-cAMP w ludzkich komórkach raka sutka MCF-7 opornych na wiele leków.

Sześciokrotne zmniejszenie ekspresji mRNA mdr-1 przez 8-Cl-cAMP rozpoczęło się w ciągu 8 godzin leczenia i było związane ze zmniejszeniem syntezy P-glikoproteiny i ze wzrostem akumulacji winblastyny. Obniżenie ekspresji mdr-1 po leczeniu 8-Cl-cAMP obserwowano również w liniach komórkowych ludzkiego raka jajnika opornych na wiele leków. Wiadomo, że 8-Cl-cAMP zmienia stosunek dwóch podjednostek regulatorowych, RI i RII, kinazy białkowej A (PKA). Zaobserwowaliśmy, że RI alfa zmniejszyło się w ciągu 24 godzin leczenia 8-Cl-cAMP, że RII beta zwiększyło się po zaledwie 3 godzinach leczenia, a aktywność katalityczna PKA pozostała niezmieniona w ciągu 48 godzin leczenia 8-Cl-cAMP. Wyniki są zgodne z hipotezą, że ekspresja mdr-1 jest częściowo regulowana przez zmiany w poziomach izoenzymów PKA. Continue reading „Obniżenie ekspresji mdr-1 przez 8-Cl-cAMP w ludzkich komórkach raka sutka MCF-7 opornych na wiele leków.”

Natychmiastowe wczesne indukowanie genów i aktywacja kinazy MAP podczas odzyskiwania z metabolicznego hamowania w hodowanych miocytach sercowych.

Aby zbadać, w jaki sposób miocyty sercowe powracają do zdrowia po krótkim okresie niedokrwienia, zastosowaliśmy model hamowania metabolicznego (MI), jeden z modeli niedokrwiennych in vitro, miocytów kurczęcych zarodkowych komorowych oraz zbadano indukcję mRNA genów o natychmiastowym wczesnym (IE) i aktywność kinazy białkowej aktywowanej mitogenem (MAP). Przeprowadziliśmy analizę Northern blot, aby zbadać ekspresję mRNA c-jun, c-fos i c-myc podczas MI za pomocą mM NaCN i 20 mM 2-deoksy-d-glukozy, a także podczas odzyskiwania z MI 30 min. . MRNA c-fos indukowano przejściowo w czasie 30 i 60 minut podczas odzyskiwania. Ekspresja mRNA c-jun była istotnie zwiększona w 30, 60, 90 i 120 min podczas odzyskiwania (odpowiednio 3,0-, 4,7-, 2,4- i 1,9-krotna indukcja), podobnie jak ekspresja c-myc mRNA (indukcja odpowiednio 1,4-, 1,7-, 1,8- i 2,0-krotna). Continue reading „Natychmiastowe wczesne indukowanie genów i aktywacja kinazy MAP podczas odzyskiwania z metabolicznego hamowania w hodowanych miocytach sercowych.”