Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T ad 5

Przeciwnie, Smad2, drugi Smad, który ulega aktywacji przez receptor TGF-., był obecny na prawidłowych poziomach we wszystkich 20 próbkach (pokazano dla 6 próbek na Figurze 1A). Aby ocenić mechanizm leżący u podstaw utraty białka Smad3 w komórkach T ALL, wykorzystaliśmy RT-PCR do pomiaru poziomu mRNA Smad3 w próbkach od 8 z 10 dzieci. Mit RNA Smad3 był obecny we wszystkich ośmiu próbkach, a tożsamość tych produktów PCR została potwierdzona jako Smad3 za pomocą bezpośredniej sekwencji analizy DNA oczyszczonego z żelu (Figura 1C). Nie stwierdzono obniżenia poziomu mRNA Smad3 w próbkach ALL komórek T, w porównaniu z poziomami w prawidłowych komórkach T i w próbkach ANLL. Aby określić, czy utrata białka Smad3 była konsekwencją zmian w genie MADH3, który koduje Smad3, zsekwencjonowaliśmy wszystkie dziewięć eksonów genu, używając jako odniesienia genomowego DNA z normalnych komórek T. Continue reading „Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T ad 5”

Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie ad 5

Test sumy rang Wilcoxona i test t zostały użyte do identyfikacji genów, które ulegały zróżnicowanej ekspresji we wrażliwym i opornym ALL (p <0,001). Każda kolumna reprezentuje próbkę ALL oznaczoną według tego, czy była ona wrażliwa (zielona), czy odporna (czerwona) na dany lek, a każdy rząd reprezentuje zestaw sond. Mapy ciepła po lewej stronie rysunku wskazują wysoki (czerwony) lub niski (zielony) poziom ekspresji w stosunku do liczby standardowych odchyleń od średniej. W przypadku prednizolonu stwierdzono, że 42 zestawy sond rozróżniają oporne komórki białaczkowe od wrażliwych komórek białaczki (33 geny i 3 komplementarne klony DNA [cDNA]); dla winkrystyny zidentyfikowano 59 takich zestawów sond (40 genów i 14 klonów cDNA); dla asparaginaz zidentyfikowano 54 takie zestawy sond (35 genów i 10 klonów cDNA); a dla daunorubicyny zidentyfikowano 22 takie zestawy sond (20 genów i 2 klony cDNA). Trójwymiarowe wykresy po prawej stronie pokazują trzy główne składniki oparte na istotnych genach odróżniających dla każdego leku. Continue reading „Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie ad 5”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli czesc 4

Transfekcję prowadzono przy użyciu .g DNA na mililitr i Tfx50 (stosunek 1: 2 do 1: 4) przez jedną godzinę w pożywce bez surowicy. Pięć procent surowicy płodowej cielęcej dodano następnie do pożywki na 24 godziny przed wykonaniem mikroskopii konfokalnej żywych komórek (model LSM 510, Zeiss). Długość fali wzbudzenia laserowego wynosiła 488 nm; fluorescencję wykrywano pomiędzy 505 i 550 nm przy użyciu otworu otworkowego o wielkości 106 .m. Autofluorescencja nie została wykryta między 560 a 615 nm przy użyciu długości fali 543 nm. Wyciągi jądrowe i cytosolowe oraz test przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej
Wyciągi jądrowe i cytosolowe przygotowano z hodowli, które były w 80% konfluentne, jak opisano poprzednio.25 Komórki mięśni gładkich oskrzeli zeskrobano z kolb 175 cm i wirowano przy 5000 x g przez 2 minuty w 4 ° C, i osad ponownie zawieszono. Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli czesc 4”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 11

Analiza metodą Western blot koimmunoprecypitatów wykazała wyraźne pasmo dla C / EBP., gdy stosowano przeciwciało przeciwko receptorowi glukokortykoidowemu do immunoprecypitacji i dla receptora glukokortykoidowego, gdy użyto przeciwciała przeciw C / EBP-.. Przeciwnie, nietransfekowane komórki mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą nie wykazały żadnego sygnału ani dla C / EBP., ani dla receptora glukokortykoidowego. Jednakże, gdy te komórki mięśni gładkich oskrzeli transfekowano ludzkim wektorem ekspresyjnym C / EBP. 48 godzin przed stymulacją budezonidem i ekstrakty jądrowe przygotowano 3 godziny po dodaniu leku, a następnie koimmunoprecypitacji, obserwowaliśmy pasmo dla C / EBP. gdy użyto przeciwciała przeciw receptorowi glukokortykoidowemu, a także pasma dla receptora, gdy użyto przeciwciała przeciw C / EBP. Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 11”

Mitogenna odpowiedź psich komórek nabłonka podstawnego w hodowli krótkoterminowej na transformujący czynnik wzrostu alfa i insulinopodobny czynnik wzrostu I.

Przedstawiono metody umożliwiające hodowlę szybko dzielących się komórek nabłonka żołądka w celu zbadania regulacji replikacji komórek śluzówki. Komórki z psiej błony śluzowej zostały zdyspergowane przez traktowanie enzymem, wzbogacone przez filtrację i elutriację i hodowane na żelu kolagenowym w pożywce DMEM / F12. Po 48 godzinach więcej niż 95% komórek wykazywało immunoreaktywność z przeciwciałem wobec cytokeratyny, markera nabłonka. Komórki utworzyły konfluentne monowarstwy w ciągu 72 godzin z oporem transbłonowym wynoszącym 1600 ohm.cm2 po zamontowaniu w komorze Ussinga, co wskazuje na zachowanie charakterystyki komórek nabłonka. Surowica cielęca (0,1-2%) dawała zależne od dawki działanie mitogenne, widoczne dzięki zwiększeniu włączenia [3H] -tymidyny do materiału wytrąconego kwasem i liczby komórek. Continue reading „Mitogenna odpowiedź psich komórek nabłonka podstawnego w hodowli krótkoterminowej na transformujący czynnik wzrostu alfa i insulinopodobny czynnik wzrostu I.”

Dietetyczna regulacja ekspresji genu cholecystokininy jelitowej szczura.

Cholecystokinina (CCK) jest hormonem żołądkowo-jelitowym wytwarzanym przez dyskretne komórki endokrynne w górnym jelicie cienkim i uwalniany po spożyciu posiłku. Niniejsze badanie zaprojektowano w celu określenia, czy zwiększone wydzielanie CCK jest związane ze wzrostem poziomów mRNA CCK w jelitach. Szczury, przygotowane za pomocą wbudowanych kaniuli wewnątrzpodstawowych, po raz pierwszy otrzymywały dietę elementarną, która nie stymulowała uwalniania CCK. Następnie, jako środek stymulujący wydzielanie CCK, inhibitor trypsyny soi poddawano perfuzji do 24 godzin. Podawanie inhibitorów trypsyny zwiększało poziomy CCK w osoczu z 0,9 +/- 0,1 do około 5 pmol / litr. Continue reading „Dietetyczna regulacja ekspresji genu cholecystokininy jelitowej szczura.”

Wpływ spożywanego tłuszczu, węglowodanów i białka na katabolizm aminokwasów rozgałęzionych podczas ograniczania kalorii.

Aby ocenić wpływ każdego kalorycznego źródła pokarmowego na katabolizm aminokwasów rozgałęzionych, zbadaliśmy tempo oksydacji leucyny przed i po otyłych ochotnikach spożyliśmy jedną z następujących diet na jeden tydzień: (a) głód, (b) 300 lub 500 cal tłuszczu / d, (c) 300 lub 500 cal węglowodanu / d, (d) 300 lub 500 cal białka / d, (e) mieszanina węglowodanów (300 cal / d) i tłuszczu (200 cali) / d) lub (f) mieszaniną węglowodanów (300 cal / d) i białka (200 cal / d). Głód istotnie zwiększał szybkość utleniania leucyny (1,4 +/- 0,11 vs. 1,8 +/- 0,16 mmol / h, P mniej niż 0,01). To samo miało miejsce w przypadku diet tłuszczowych i białkowych. W ostrym kontraście, 500-calowa dieta węglowodanowa znacznie zmniejszyła szybkość utleniania leucyny (1,3 +/- 0,13 vs. Continue reading „Wpływ spożywanego tłuszczu, węglowodanów i białka na katabolizm aminokwasów rozgałęzionych podczas ograniczania kalorii.”

Izolacja lipoprotein o wysokiej gęstości z komórek nabłonka jelitowego szczura.

Wcześniejsze badania określiły formy lipoprotein o dużej gęstości (HDL) w szczurzowej limfie krezkowej, sugerując, że mają one wydzielnicze pochodzenie. Badanie to opisuje izolację i charakterystykę wewnątrzkomórkowego HDL jelit. Wykonano dwa preparaty w następujący sposób: (a) wyizolowano enterocyty szczura i przygotowano frakcję organelli Golgiego. (b) Homogenaty komórkowe poddano kawitacji azotem i przygotowano frakcję cytoplazmatyczną. Lipoproteiny izolowano z obu preparatów przez sekwencyjne ultrawirowanie. Continue reading „Izolacja lipoprotein o wysokiej gęstości z komórek nabłonka jelitowego szczura.”

Leczenie cyklofosfamidem rozszerza krążącą krwiotwórczą pulę komórek macierzystych u psów.

W krwi obwodowej człowieka po chemioterapii przeciwnowotworowej zaobserwowano zwiększoną liczbę krążących komórek prekursorowych granulocytów-monocytów (CFUc). Opracowaliśmy model psa do badania biologicznego znaczenia tego zjawiska do rekonstytucji krwiotwórczej po hematopoetycznie śmiertelnej ekspozycji na całkowite napromienienie ciała (TBI). Po podaniu cyklofosfamidu zaobserwowano 16-krotną ekspansję cyrkulujących liczb CFUc w okresie szybkiego odzyskiwania leukocytów, który wystąpił po nadiru wywołanym przez chemioterapię. Wcześniej wspominaliśmy o związku pomiędzy odzyskiwaniem leukocytów a rozszerzaniem CFUc w naszych badaniach na ludziach. Po 900 próbach rewizyjnych przeprowadzono rekonstytucję hematopoetyczną TBI z autologicznymi, kriokonserwowanymi kolekcjami jednojądrzastych komórek krwi obwodowej uzyskanych albo w czasie ekspansji post-cyklofosfamidowej CFUc (grupa A, 14 psów), albo bez ekspansji CFUc (grupa B, 12 psów). Continue reading „Leczenie cyklofosfamidem rozszerza krążącą krwiotwórczą pulę komórek macierzystych u psów.”

Metabolizm peryferyjny nienaruszonego hormonu przytarczycznego: rola wątroby i nerki oraz wpływ przewlekłej niewydolności nerek

Szybkość zaniku plazmy (szybkość metabolizmu) podawanego nienaruszonego parathormonu (nietknięty PTH) analizowano u obudzonych psów z cewnikami żył wątrobowych i nerkowych. Stwierdzono, że szybkość metabolizmu (MCR) nienaruszonego PTH była bardzo szybka, 21,6. 3,1 ml / min na kg u 11 normalnych psów. Wątroba stanowiła największą część MCR nienaruszonego PTH (61. 4%) z uwagi na różnicę tętniczą minus żylną (a – v) w wątrobie wynoszącej 45. Continue reading „Metabolizm peryferyjny nienaruszonego hormonu przytarczycznego: rola wątroby i nerki oraz wpływ przewlekłej niewydolności nerek”