Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T czesc 4

Komórki stymulowano przez 60 godzin związanym z płytką anty-CD3. (2 .g na mililitr) pod nieobecność lub w obecności rekombinowanego ludzkiego TGF-.1 (5 ng na mililitr), pulsowano .C trytowanej tymidyny na studzienkę przez 12 godzin, i zbierane za pomocą kombajnu do zbierania komórek Brandel. Ilość włączonej [3H] tymidyny zmierzono za pomocą spektrofotometrii scyntylacyjnej (1450 licznika scyntylacyjnego płynu Microbeta, Perkin Elmer). W równoległych seriach eksperymentów obejmujących te same warunki, supernatanty z hodowli komórkowej usunięto po 48 godzinach i zmierzono poziomy interleukiny-2 przy użyciu zestawu do testu immunoenzymatycznego Quantikine M zgodnie z instrukcjami producenta (R & D Systems) . Immunohistochemia
Białka Smad barwiono na 5-mikrometrowych odcinkach utrwalonych w formalinie, zatopionych w parafinie mysich tkanek (serce, nerki i węzły chłonne), jak opisano wcześniej, z zastosowaniem automatycznego systemu barwienia komórek Optimax Plus 2.0 z oprogramowaniem badawczym (BioGenex). Continue reading „Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T czesc 4”

Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie czesc 4

Zestawy sond z tym samym symbolem genu zostały policzone jako jeden. Podstawowe dane są dostępne za pośrednictwem GeneExpression Omnibus Narodowego Centrum Informacji Biotechnologicznej pod adresem http://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo/ (Platforma, GPL91, Sample, GSM9653 do 9934, Series, GSE635 do 660). Dodatkowe informacje dotyczące zastosowanych metod można znaleźć na stronie www.stjuderesearch.org/data/ALL4/ pod adresem www.eur.nl/fgg/kgk/ oraz w dodatkowym dodatku. Wyniki
Ryc. 1. Continue reading „Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie czesc 4”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli cd

Proliferację komórek oceniano po trzech i pięciu dniach leczenia 5% płodową surowicą cielęcą; komórki przemyto dwukrotnie chłodzoną lodem solą fizjologiczną buforowaną fosforanem, a następnie potraktowano trypsyną i EDTA (odpowiednio mM i 0,05 procent) przez jedną minutę. Roztwór trypsyny usunięto, a komórki ponownie zawieszono w 0,5 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanem. Komórki zawarte w 0,01 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanem zliczono w dwóch powtórzeniach dla każdej studzienki za pomocą ulepszonego hemocytometru Neubauera. Włączenie [3H] tymidyny zmierzono zgodnie ze standardowymi protokołami. Komórki przygotowano tak, jak były dla zliczeń komórek, ale hodowano je tylko przez 24 godziny po stymulacji i dodaniu 5 .Ci [3H] tymidyny na mililitr w ciągu ostatnich 6 godzin hodowli. Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli cd”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 10

Kompleks receptora glukokortykoidu (GR) -C / EBP. i jego funkcja antyproliferacyjna w komórkach mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą. Panel A pokazuje reprezentatywny test przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej ekstraktów jądrowych komórek mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą, które przejściowo transfekowano przez 24 godziny (linia 1) lub 48 godzin (linia 2) za pomocą wektora ekspresyjnego C / EBP. i inkubowano dla ostatnie 3 godziny z 10-8 M budezonidem. Ścieżka 3 pokazuje wektor C / EBP. Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 10”

Fizjologiczna regulacja stężenia 1,25-dihydroksywitaminy D w surowicy przez fosfor u zdrowych mężczyzn.

Zadaliśmy to pytanie: u normalnych ludzi, czy normalne spożycie w diecie czy normalne stężenie fosforu w surowicy jest wyznacznikiem stężenia w surowicy 1,25 (OH) 2D. U siedmiu normalnych mężczyzn, u których zawartość fosforanów w diecie zmniejszyła się z 2300 do 625 mg / d, każde spożycie przez 8-9 dni, w ściśle kontrolowanych, normalnych warunkach metabolicznych, mierzyliśmy stężenia w surowicy 1,25 (OH) 2D dziennie, a stężenia fosforu co godzinę w okresie 24 godzin, przed i po ograniczeniu. Zmniejszenie wywołanego dietą fosforu: (a) 58% wzrost poziomu 1,25 (OH) 2D w surowicy; (b) 35% spadek poziomów fosforu w surowicy mierzony po południu; (c) 12% zmniejszenie średniego poziomu fosforu w surowicy o 24 h; ale, (d) brak obniżenia poziomu fosforu na czczo na czczo. Stężenie w surowicy 1,25 (OH) 2D różniło się odwrotnie i znacząco przy 24-godzinnych średnich stężeniach fosforu (r = -0,77, P mniej niż 0,001). Kiedy te dane są połączone z tymi z naszego wcześniejszego badania, w których zawartość fosforu w diecie zmieniała się w ekstremalnym zakresie, związek pomiędzy poziomami w surowicy 1,25 (OH) 2D i 24-godzinnym poziomem fosforu w surowicy jest jeszcze silniejszy (r = -0,90, P mniej niż 0,001). Continue reading „Fizjologiczna regulacja stężenia 1,25-dihydroksywitaminy D w surowicy przez fosfor u zdrowych mężczyzn.”

Podaż fosforu w diecie moduluje rytm okołodobowy w stężeniu fosforu w surowicy. Implikacje dla produkcji nerkowej 1,25-dihydroksywitaminy D.

Niedawno donieśliśmy, że u zdrowych mężczyzn zmiany w szybkości wytwarzania (PR) 1,25-dihydroksywitaminy D [1,25- (OH) 2D] stanowiły 80% wzrost i 30% spadek stężenia w surowicy, który był wywołane odpowiednio przez ograniczenie i suplementację diety fosforu. Te zmiany w PR i stężeniu 1,25- (OH) 2D w surowicy mogą pośredniczyć w zmianach stężenia fosforu w surowicy, które występują po porannym okresie głodzonym. Aby zbadać tę hipotezę, zmierzono stężenie fosforu w surowicy we krwi pobieranej w odstępach godzinnych przez 24 godziny u sześciu zdrowych mężczyzn, u których fosfor w diecie początkowo utrzymywał się na poziomie 500 mg / 70 kg masy ciała dziennie przez 9 dni, a następnie ograniczono do 500 mg. / d (w połączeniu z wodorotlenkiem glinu podawanym doustnie) przez 10 dni, a następnie uzupełniono do 3000 mg / dzień przez 10 dni. Gdy fosfor w diecie był prawidłowy, stężenie fosforu w surowicy wykazywało prawidłowy rytm okołodobowy: szybki spadek od wczesnego rana do nadiru przy 1100, a następnie wzrost do plateau po 1600 hi dalszy wzrost do akrofazy (szczyt) w 0030 r. Continue reading „Podaż fosforu w diecie moduluje rytm okołodobowy w stężeniu fosforu w surowicy. Implikacje dla produkcji nerkowej 1,25-dihydroksywitaminy D.”

Izolacja lipoprotein o wysokiej gęstości z komórek nabłonka jelitowego szczura.

Wcześniejsze badania określiły formy lipoprotein o dużej gęstości (HDL) w szczurzowej limfie krezkowej, sugerując, że mają one wydzielnicze pochodzenie. Badanie to opisuje izolację i charakterystykę wewnątrzkomórkowego HDL jelit. Wykonano dwa preparaty w następujący sposób: (a) wyizolowano enterocyty szczura i przygotowano frakcję organelli Golgiego. (b) Homogenaty komórkowe poddano kawitacji azotem i przygotowano frakcję cytoplazmatyczną. Lipoproteiny izolowano z obu preparatów przez sekwencyjne ultrawirowanie. Continue reading „Izolacja lipoprotein o wysokiej gęstości z komórek nabłonka jelitowego szczura.”

Jednokierunkowy transfer endonadtlenków prostaglandyn między płytkami krwi i komórkami śródbłonka.

Ważną determinantą interakcji ściany płytkowej z płytką jest lokalna równowaga produkcji śródbłonkowej prostacykliny (PGI2) i tromboksanu płytkowego (TX) A2, labilnych eikozanoidów z przeciwstawnym wpływem na hemostazę. Sporne dowody sugerują, że pochodzące z płytek półprodukty oksoperoksytankowe prostaglandyn mogą być wykorzystywane jako substraty do syntezy naczyniowych PGI2. Stosując kilka różnych podejść, stwierdziliśmy, że płytki mogą przenosić endonadtlenki do hodowanych komórek śródbłonka w celu wydajnej konwersji do PGI2, ale wzajemny transfer endonadtlenków śródbłonka do wykorzystania przez płytkową syntetazę tromboksanu nie występuje w tych samych warunkach eksperymentalnych. Jednakże, płytki krwi mogą wykorzystywać kwas arachidonowy uwalniany przez komórki śródbłonka do metabolizmu lipooksygenazy. Bezpośrednio wykazaliśmy wytwarzanie [3H] 6-keto-PGF1 alfa (produkt rozpadu [3H] PGI2) przez komórki śródbłonka traktowane aspiryną w obecności płytek stymulowanych kwasem [3H] arachidonowym. Continue reading „Jednokierunkowy transfer endonadtlenków prostaglandyn między płytkami krwi i komórkami śródbłonka.”

Rola pH w produkcji wodoru z węglowodanów przez bakterie okrężnicy. Badania in vivo i in vitro.

Wodór wytwarzany przez bakterie okrężnicy i wydzielany w wydychanym powietrzu jest użytecznym wskaźnikiem nieprawidłowego wchłaniania węglowodanów. Ponieważ zawartość okrężnicy często jest kwaśna u osób z zespołem złego wchłaniania węglowodanów i u normalnych noworodków, określiliśmy wpływ zakwaszenia okrężnicy na produkcję H2. Zakwaszenie zawartości okrężnicy poprzez dietę oznacza znaczne zmniejszenie nadmiaru wydychanego H2 z 55,4 +/- 11,1 (SEM) do 12,2 +/- 3,1 ml / 4 h (P mniej niż 0,05) po podaniu 0,3 g / kg nieulegającego cukru laktulozy do pięciu normalnych dorosłych osób. Podobnie, odpowiedź H2 oddechu na laktozę została zmniejszona lub wyeliminowana w dwóch sprawdzonych laktozowych malabsorberach po zakwaszeniu. Korelację między pH i wytwarzaniem H2 z węglowodanów badano dalej u dorosłych i noworodków, stosując system inkubacji in vitro w kale. Continue reading „Rola pH w produkcji wodoru z węglowodanów przez bakterie okrężnicy. Badania in vivo i in vitro.”

Wpływ kortykosteroidów na ludzką monocytarną IgG i receptory dopełniacza.

Ilościowy test in vitro zastosowano do bezpośredniej oceny działania kortykosteroidów na IgG i funkcję receptora dopełniacza w ludzkich jednojądrzastych komórkach fagocytujących. W tym układzie kortykosteroidy zostały rozpuszczone w lipidach cholesterol-fosfolipidowych przed ekspozycją na komórki jednojądrzaste. Solubilizowane kortykosteroidy w stężeniach od 10 (-4) do 10 (-3) M hamowały aktywność IgG i receptora dopełniacza w sposób zależny od dawki. Hamowanie było zależne od czasu interakcji komórek jednojądrzastych z kortykosteroidami i było pół-maksymalne o 15 minut. Działanie hamujące we wszystkich stężeniach hydrokortyzonu zostało częściowo przezwyciężone poprzez zwiększenie liczby cząsteczek IgG na erytrocyt. Continue reading „Wpływ kortykosteroidów na ludzką monocytarną IgG i receptory dopełniacza.”