Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T cd

Związane z cykliną D3 kompleksy immunologiczne przemyto trzykrotnie 500 .l buforu RIPA i osad ponownie zawieszono w 30 .l buforu ładującego żel, a następnie ogrzewano w 95 ° C przez pięć minut w celu usunięcia związanych białek z kulek agarozowych. Kompleksy immunologiczne p27Kip1 traktowano w podobny sposób. Obie związane z cykliną D3 i wolne frakcje p27Kip1 rozdzielono za pomocą elektroforezy w żelu z dodecylosiarczanem sodu / poliakryloamidem na żelu TRIS-Glycine Novex (4 do 20 procent), przeniesiono na nitrocelulozę i inkubowano przez noc w 4 ° C z królicze przeciwciało poliklonalne przeciwko ludzkiemu p27Kip1 (sc-528, Santa Cruz Biotech) w rozcieńczeniu 1: 500 w soli fizjologicznej buforowanej TRIS zawierającej 4% mleka beztłuszczowego. Przeciwgrzybicze IgG osy skoniugowane z peroksydazą chrzanową (Amersham) stosowano do wykrywania związanego przeciwciała przeciw p27Kip1 za pomocą chemiluminescencji (system Pierce Super Signal West Pico). Analiza RNA Smad3 Messenger
RNA oczyszczono z próbek komórek białaczki i świeżo izolowanych prawidłowych komórek T krwi obwodowej przy użyciu odczynnika Trizol (Invitrogen) i wszelkie zanieczyszczające genomowe DNA usunięto przez trawienie DNazą RQ1 (Promega). Continue reading „Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T cd”

Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie cd

Tablice pominięto, jeśli współczynnik skalowania przekroczył 3 SD średniej lub jeśli stosunek 3 do 5 informacyjnego RNA dla dehydrogenazy .-aktyny lub dehydrogenazy gliceraldehyd-3 był większy niż 3. Z łącznej liczby 22 283 zestawów sond, te wyrażone w mniej niż pięciu pacjentach zostały pominięte, pozostawiając 14.550 zestawów sond do kolejnych analiz. Dla każdego czynnika antybakteryjnego zidentyfikowaliśmy geny najbardziej dyskryminujące pod względem odporności i czułości, stosując test sumy rang Wilcoxona i test t dla każdego zestawu sond i oszacowano współczynnik fałszywego wykrywania przy użyciu wartości q zgodnie z Storey i Tibshirani. wybraną wartość P (alfa) dla ocenianych genów dyskryminujących (np. P <0,001), ogólne znaczenie szacowanego odsetka fałszywych odkryć obliczono jako prawdopodobieństwo zaobserwowania równych lub niższych wyników fałszywych odkryć na podstawie 1000 losowych permutacji. Continue reading „Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie cd”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad

Aktywacja C / EBP. i C / EBP., które są antyproliferacyjnymi czynnikami transkrypcyjnymi, prowadzi do różnicowania komórek.14-17 W przeciwieństwie do C / EBP. i C / EBP. wydaje się napędzać progresję cyklu komórkowego.16-19 form C / EBP. kompleksy z C / EBP. Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 9

Jednak, aby zwizualizować te mniejsze prążki białek, musieliśmy podwoić czas ekspozycji immunoblotów. Aby określić, czy brak C / EBP. jest cechą patofizjologiczną obecną w komórkach innych niż komórki mięśni gładkich oskrzeli, wyizolowaliśmy limfocyty krwi obwodowej od czterech osób z astmą i czterech bez astmy. Wykryliśmy białko C / EBP. we wszystkich próbkach (Figura 4B). Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 9”

Niekoordynowana regulacja białek Gs serca i receptorów beta-adrenergicznych za pomocą bodźca fizjologicznego, chronicznego wysiłku dynamicznego.

Użyliśmy bodźca fizjologicznego, przewlekłego dynamicznego wysiłku fizycznego u świń, aby zbadać wynikające zmiany w odpowiedzi chronotropowej na katecholaminę i cechy biochemiczne sercowych receptorów beta-adrenergicznych i stymulujące nukleotyd nukleotydowy guaniny, GS. Długotrwała praca na bieżni spowodowała znaczną (44%) regulację w dół receptorów beta-adrenergicznych prawej komory, ale dawka izoproterenolu dająca 50% maksymalnego zwiększenia częstości akcji serca została zmniejszona o 57% (z 0,07 +/- 0,03 do 0,03 +/- 0,01 mikrogramów / kg, P mniej niż 0,02) pomimo tego zmniejszenia liczby receptorów. Ta różnica między liczbą receptorów a reakcją fizjologiczną sugerowała zmienioną transdukcję sygnału. Dlatego ilościowo oznaczono GS w błonach miokardialnych uzyskanych przed i po długotrwałym ćwiczeniu w kompetycyjnym teście ELISA opartym na przeciwciele antypeptydowym opracowanym dla części alfa S GS. Stwierdziliśmy 42% wzrost ilości GS w błonach prawego przedsionka (z 11,4 +/- 0,8 do 16,2 +/- 2,0 pmol / mg, P mniej niż 0,05) i 76% wzrost ilości GS w lewej komorze membrany (od 15,6 +/- 2,6 do 27,4 +/- 5,2 pmola / mg; P = 0,02) po przewlekłym działaniu. Continue reading „Niekoordynowana regulacja białek Gs serca i receptorów beta-adrenergicznych za pomocą bodźca fizjologicznego, chronicznego wysiłku dynamicznego.”

Czynnik aktywujący płytki krwi. Silny czynnik chemotaktyczny i chemokinetyczny dla ludzkich eozynofili.

Czynnik aktywujący płytki krwi (PAF-acether), mediator zapalny o szerokim zakresie aktywności biologicznych, w tym agregację neutrofili i chemotaksję, badano pod kątem jego wpływu na lokomocję ludzkich eozynofili (chemotaksja i chemokinezy). Ludzkie eozynofile (25-95% czystości) uzyskano od dawców z różnymi chorobami związanymi z hipereozynofilią. Aceton PAF wywoływał kierunkowe lokowanie się eozynofili, zależnie od czasu i dawki, w stężeniach od 10 (-5) do 10 (-8) M; lizo-PAF wykazywał minimalną aktywność w tym samym zakresie dawek. W porównaniu z acetylem PAF, wrażliwość lokomotoryczna eozynofili leukotrienu B4 (LTB4), histaminy oraz czynnika chemotaktycznego walin i alanylo-eozynofili w tetapeptydach anafilaktycznych (ECF-A) była nieistotna. Odwrotnie, reakcja neutrofili na acetylen PAF (optymalnie 10 (-6) M) była porównywalna z LTB4 (optymalna dawka 10 (-8) M). Continue reading „Czynnik aktywujący płytki krwi. Silny czynnik chemotaktyczny i chemokinetyczny dla ludzkich eozynofili.”

Zniekształcenie kłębuszków w postaci arachidonianu w nefrotoksycznym nerczycowym zapaleniu nerek u szczurów.

Lipoksygenację arachidonianową do monohydroksylowanych kwasów eikozatetraenowych (HETE) badano w nefrotoksycznym nerczycowym zapaleniu nerek u szczurów (NSN). Pojedyncza infuzja nefrotoksycznej surowicy zwiększyła konwersję [3H] kwasu arachidonowego ([3H] C20: 4) do [3H] 12-HETE w kłębuszkach izolowanych z nefrytowych szczurów w porównaniu z kontrolami. Procentowa konwersja kwasu [3H] arachidonowego wynosiła 1,95 +/- 0,2% w kłębuszkach kontrolnych i 14,2 +/- 2% w kłębuszkach nerkowych 2 d po indukcji choroby. Nie zanotowano znaczących zmian w konwersji [3H] C20: 4 do [3H] 5-, 8- i 9-HETE. Ekstrakcja kłębuszkowego HETE przez hydrolizę zasadową, w celu oceny możliwej reacylowania HETE po ich wytworzeniu, potwierdziła obecność 12-HETE i nie dała dowodu na syntezę 5-HETE. Continue reading „Zniekształcenie kłębuszków w postaci arachidonianu w nefrotoksycznym nerczycowym zapaleniu nerek u szczurów.”

Wydzielanie wodorowęglanu i absorpcja chlorków przez korowe kolektory zbiorcze. Rola wymiany chlorków / wodorowęglanów.

Korowe kanały zbierające (CCD) królików traktowanych deoxycorticosterone (DOC) aktywnie wydzielają wodorowęglan z dużą szybkością. Aby zbadać mechanizm wydzielania dwuwęglanów, zmierzono transport wodorowęglanów i chlorków w CCD od królików traktowanych DOC przez 9-24 dni. Usunięcie chlorku (zastąpionego glukonianem) z perfuzatu i kąpieli hamowało wydzielanie dwuwęglanów bez zmiany napięcia przeznabłonkowego. Usunięcie chlorku tylko z kąpieli zwiększyło wydzielanie wodorowęglanu, podczas gdy usuwanie chlorku tylko z wydzielania hamowanego przez perfuzat. W przeciwieństwie do efektu usuwania chlorku, usunięcie sodu zarówno z perfuzatu, jak i kąpieli (zastąpienie N-metylo-D-glukaminą) nie zmieniło szybkości wydzielania dwuwęglanu. Continue reading „Wydzielanie wodorowęglanu i absorpcja chlorków przez korowe kolektory zbiorcze. Rola wymiany chlorków / wodorowęglanów.”

Ontogeneza transportu taurocholanu przez pęcherzyki błony szczoteczkowej jelita szyjnego.

Aspekty rozwojowe transportu taurocholanu do pęcherzyków błony czołowej szczoteczki do jelita krętego badano u szczurów w wieku 2 tygodni (ssące), 3-tygodniowe (odsadzone) i 6-tygodniowe (dorastające). Absorpcja taurocholanu (pikomole na miligram białka) do pęcherzyków błony szczotki brzegowej przygotowanej od 2-tygodniowych szczurów była podobna w warunkach gradientu Na + i K + (na zewnątrz większa niż wewnątrz). Przeciwnie, wychwyt u szczurów w wieku 3- i 6-tygodniowym był znacznie zwiększony po 20 s oraz po 1, 2 i 5 minutach inkubacji w obecności gradientu Na + w porównaniu z inkubacją gradientu K + (P mniejsze niż 0,05). W warunkach wymiany izotopowej wykres prędkości aktywnego poboru w funkcji stężenia taurocholanu (0,10-1,0 mM) w 2-tygodniowych pęcherzykach szczurów był liniowy i zbliżał się do osi poziomej, co sugeruje brak aktywnego transportu. Jednak podobne poletka u szczurów w wieku 3- i 6-tygodniowym opisywały hiperbolę prostokątną, wskazującą zależny od Na +, nadający się do nasycenia system kotransportu. Continue reading „Ontogeneza transportu taurocholanu przez pęcherzyki błony szczoteczkowej jelita szyjnego.”

Odpowiedź ogólnoustrojowa na uszkodzenie termiczne u szczurów. Przyspieszona degradacja białka i zmienione wykorzystanie glukozy w mięśniach.

Ujemny bilans azotowy i zwiększone zużycie tlenu po urazie termicznym u ludzi i zwierząt doświadczalnych związane są z zasięgiem oparzenia. Aby określić, czy wadliwy metabolizm mięśni ogranicza się do obszaru urazu, zbadaliśmy metabolizm białka i glukozy w mięśniach kończyn przednich szczura 48 godzin po oparzeniu kończyn tylnych. Uszkodzenie to zwiększyło degradację białka mięśniowego (PD) z 140 +/- 5 do 225 +/- 5 nmoli tyrozyny / g na godzinę, ale nie zmieniło syntezy białka. Uwalnianie mleczanu w mięśniach było większe niż 70%, chociaż katecholaminy w osoczu i cykliczne AMP w mięśniach nie były zwiększone. Badania reakcji na dawkę insuliny wykazały, że oparzenie zmniejsza reakcję syntezy glikogenu mięśniowego na insulinę, ale nie zmienia jej wrażliwości na insulinę. Continue reading „Odpowiedź ogólnoustrojowa na uszkodzenie termiczne u szczurów. Przyspieszona degradacja białka i zmienione wykorzystanie glukozy w mięśniach.”