Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T ad 5

Przeciwnie, Smad2, drugi Smad, który ulega aktywacji przez receptor TGF-., był obecny na prawidłowych poziomach we wszystkich 20 próbkach (pokazano dla 6 próbek na Figurze 1A). Aby ocenić mechanizm leżący u podstaw utraty białka Smad3 w komórkach T ALL, wykorzystaliśmy RT-PCR do pomiaru poziomu mRNA Smad3 w próbkach od 8 z 10 dzieci. Mit RNA Smad3 był obecny we wszystkich ośmiu próbkach, a tożsamość tych produktów PCR została potwierdzona jako Smad3 za pomocą bezpośredniej sekwencji analizy DNA oczyszczonego z żelu (Figura 1C). Nie stwierdzono obniżenia poziomu mRNA Smad3 w próbkach ALL komórek T, w porównaniu z poziomami w prawidłowych komórkach T i w próbkach ANLL. Aby określić, czy utrata białka Smad3 była konsekwencją zmian w genie MADH3, który koduje Smad3, zsekwencjonowaliśmy wszystkie dziewięć eksonów genu, używając jako odniesienia genomowego DNA z normalnych komórek T. Continue reading „Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T ad 5”

Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie ad 5

Test sumy rang Wilcoxona i test t zostały użyte do identyfikacji genów, które ulegały zróżnicowanej ekspresji we wrażliwym i opornym ALL (p <0,001). Każda kolumna reprezentuje próbkę ALL oznaczoną według tego, czy była ona wrażliwa (zielona), czy odporna (czerwona) na dany lek, a każdy rząd reprezentuje zestaw sond. Mapy ciepła po lewej stronie rysunku wskazują wysoki (czerwony) lub niski (zielony) poziom ekspresji w stosunku do liczby standardowych odchyleń od średniej. W przypadku prednizolonu stwierdzono, że 42 zestawy sond rozróżniają oporne komórki białaczkowe od wrażliwych komórek białaczki (33 geny i 3 komplementarne klony DNA [cDNA]); dla winkrystyny zidentyfikowano 59 takich zestawów sond (40 genów i 14 klonów cDNA); dla asparaginaz zidentyfikowano 54 takie zestawy sond (35 genów i 10 klonów cDNA); a dla daunorubicyny zidentyfikowano 22 takie zestawy sond (20 genów i 2 klony cDNA). Trójwymiarowe wykresy po prawej stronie pokazują trzy główne składniki oparte na istotnych genach odróżniających dla każdego leku. Continue reading „Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie ad 5”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli czesc 4

Transfekcję prowadzono przy użyciu .g DNA na mililitr i Tfx50 (stosunek 1: 2 do 1: 4) przez jedną godzinę w pożywce bez surowicy. Pięć procent surowicy płodowej cielęcej dodano następnie do pożywki na 24 godziny przed wykonaniem mikroskopii konfokalnej żywych komórek (model LSM 510, Zeiss). Długość fali wzbudzenia laserowego wynosiła 488 nm; fluorescencję wykrywano pomiędzy 505 i 550 nm przy użyciu otworu otworkowego o wielkości 106 .m. Autofluorescencja nie została wykryta między 560 a 615 nm przy użyciu długości fali 543 nm. Wyciągi jądrowe i cytosolowe oraz test przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej
Wyciągi jądrowe i cytosolowe przygotowano z hodowli, które były w 80% konfluentne, jak opisano poprzednio.25 Komórki mięśni gładkich oskrzeli zeskrobano z kolb 175 cm i wirowano przy 5000 x g przez 2 minuty w 4 ° C, i osad ponownie zawieszono. Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli czesc 4”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 11

Analiza metodą Western blot koimmunoprecypitatów wykazała wyraźne pasmo dla C / EBP., gdy stosowano przeciwciało przeciwko receptorowi glukokortykoidowemu do immunoprecypitacji i dla receptora glukokortykoidowego, gdy użyto przeciwciała przeciw C / EBP-.. Przeciwnie, nietransfekowane komórki mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą nie wykazały żadnego sygnału ani dla C / EBP., ani dla receptora glukokortykoidowego. Jednakże, gdy te komórki mięśni gładkich oskrzeli transfekowano ludzkim wektorem ekspresyjnym C / EBP. 48 godzin przed stymulacją budezonidem i ekstrakty jądrowe przygotowano 3 godziny po dodaniu leku, a następnie koimmunoprecypitacji, obserwowaliśmy pasmo dla C / EBP. gdy użyto przeciwciała przeciw receptorowi glukokortykoidowemu, a także pasma dla receptora, gdy użyto przeciwciała przeciw C / EBP. Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 11”

Wpływ spożywanego tłuszczu, węglowodanów i białka na katabolizm aminokwasów rozgałęzionych podczas ograniczania kalorii.

Aby ocenić wpływ każdego kalorycznego źródła pokarmowego na katabolizm aminokwasów rozgałęzionych, zbadaliśmy tempo oksydacji leucyny przed i po otyłych ochotnikach spożyliśmy jedną z następujących diet na jeden tydzień: (a) głód, (b) 300 lub 500 cal tłuszczu / d, (c) 300 lub 500 cal węglowodanu / d, (d) 300 lub 500 cal białka / d, (e) mieszanina węglowodanów (300 cal / d) i tłuszczu (200 cali) / d) lub (f) mieszaniną węglowodanów (300 cal / d) i białka (200 cal / d). Głód istotnie zwiększał szybkość utleniania leucyny (1,4 +/- 0,11 vs. 1,8 +/- 0,16 mmol / h, P mniej niż 0,01). To samo miało miejsce w przypadku diet tłuszczowych i białkowych. W ostrym kontraście, 500-calowa dieta węglowodanowa znacznie zmniejszyła szybkość utleniania leucyny (1,3 +/- 0,13 vs. Continue reading „Wpływ spożywanego tłuszczu, węglowodanów i białka na katabolizm aminokwasów rozgałęzionych podczas ograniczania kalorii.”

Synteza kłębuszkowa prostaglandyn i tromboksanu w nefrotoksycznym nerczycowym zapaleniu nerek u szczurów. Wpływ na hemodynamikę nerek.

Gromadzenie kłębuszkowego arachidonianu przez wyizolowany kłębuszek szczura oceniano in vitro w zapaleniu kłębuszków nerkowych wywołanym przeciwciałem przeciwpłytkowym (przeciw GBM) indukowanym przeciwciałami za pomocą testu radioimmunologicznego dla prostaglandyn (PG) i tromboksanu. Po pojedynczym dożylnym wstrzyknięciu króliczej surowicy anty-szczurzy GBM obserwowaliśmy wzmocnienie syntezy kłębuszkowej tromboksanu B2 (TxB2) już od 2 do 3 godzin z mniejszymi przyrostami w szybkościach alfa PGF2, PGE2 i 6-keto-PGF1 alfa. W dniu 2 choroby, synteza kłębuszkowa TxB2 i, w mniejszym stopniu, PGF2 alfa i PGE2 pozostała wzmocniona, podczas gdy w dniach 8, 11 i 14 TxB2 był jedynym prostanoidem syntetyzowanym ze zwiększoną szybkością. Synteza kłębuszkowa TxB2 korelowała z 24-godzinnym wydalaniem białka przed wycięciem. 60 minut po dożylnym wlewie surowicy anty-GMB, wskaźnik filtracji kłębuszkowej (GFR) zmniejszył się (0,66 +/- 0,04 do 0,44 +/- 0,03 ml / min na 100 g, P mniej niż 0,05), bez znaczącej zmiany w osoczu nerkowym przepływ (RPF): 1,97 +/- 0,23 do 1,80 +/- 0,23 ml / min na 100 g) i bez zmiany szybkości syntezy kłębuszków PG. Continue reading „Synteza kłębuszkowa prostaglandyn i tromboksanu w nefrotoksycznym nerczycowym zapaleniu nerek u szczurów. Wpływ na hemodynamikę nerek.”

Modyfikacja dietetyczna dejifikacji tyroksyny w wątrobie szczura nie jest mediowana przez siarczany wątrobowe

Enzymatyczna dejifikacja tyroksyny (T4) jest zależna od tioli. Na czczo (72 godziny) następuje depresja wątrobowej T4 i obniża się zawartość w wątrobie sulfhydryli niebiałkowych (NP-SH) i zredukowanego glutationu (GSH). Zaproponowano, że w wyniku tych zmian w sulfhydrylach wątrobowych może pośredniczyć wpływ na czczo. Aby przetestować znaczenie zawartości tioli w tkance (wątrobie) w modyfikacji deji tiozyny T4 w następstwie manipulacji dietetycznych, zbadaliśmy sekwencyjną deodynację T4 do 3,5,3 P-tiodjodotyroniny (T3) (5 -deodowanie) i 3, 3, 5-trijodotyronina (odwrotna T3, rT3) (5-deodynowanie) w homogenatach wątroby bez dodanego tiolu z grup szczurów karmionych Purina lab chow (P) (dieta bogata w białko), sama glukoza (G) lub glukoza plus cysteina (Gc) przez 72 h lub na czczo (F) w tym samym okresie. Początkową szybkość każdej reakcji porównano ze stężeniami NP-SH i GSH w tkankach. Continue reading „Modyfikacja dietetyczna dejifikacji tyroksyny w wątrobie szczura nie jest mediowana przez siarczany wątrobowe”

Izolacja krążących kompleksów immunologicznych z wykorzystaniem komórek Raji. Separacja antygenów z kompleksów immunologicznych i wytwarzanie antyserum.

Komórki Raji wykorzystano do izolacji kompleksów antygen-przeciwciało wiążące kompleks z surowicy. Kompleksy immunologiczne związane z tymi komórkami znakowano radioaktywnie na powierzchni komórek za pomocą laktoperoksydazy. Kompleksy następnie eluowano z komórek izotonicznym buforem cytrynianowym o pH 3,2 lub odzyskiwano przez immunoprecypitację lizatów komórkowych. Antygen i fragmenty przeciwciał kompleksów izolowano przez dysocjację wirowania w gradiencie gęstości sacharozy lub przez elektroforezę w żelu z dodecylosiarczanem sodu / poliakryloamidem. Różnorodność preformowanych kompleksów immunologicznych została skutecznie wyizolowana z surowicy przy użyciu tego podejścia. Continue reading „Izolacja krążących kompleksów immunologicznych z wykorzystaniem komórek Raji. Separacja antygenów z kompleksów immunologicznych i wytwarzanie antyserum.”

Lokalizacja angiotensyny II i jej podtypu receptora podtypu w ludzkim endometrium oraz identyfikacja nowego miejsca wiązania angiotensyny o wysokim powinowactwie II.

Angiotensyna (ANG) II jest nie tylko silnym czynnikiem zwężającym naczynia, ale może również brać udział w regeneracji nowych naczyń krwionośnych. W proliferacyjnym endometrium wykryto immunoreaktywność podobną do ANG II w nabłonku gruczołowym i zrębie z nieznacznym wybarwianiem wokół śródbłonka naczyniowego. Przeciwnie, w endometrium wydzielniczym stwierdzono intensywne barwienie immunologiczne w okołonaczyniowych komórkach zrębowych wokół tętnic spiralnych endometrium z pomijalnym wybarwianiem innych typów komórek. Ilościowa autoradiografia receptora z użyciem nieselektywnego radioliganda [125I] -ANG II i selektywnych konkurencyjnych związków podtypu wykazała, że endometrium zawiera głównie receptory AT2, ze stosunkowo niską ekspresją receptorów AT1 i nowe miejsce rozpoznawania nie-AT1 / nie-AT2 angiotensyny II, które było niewrażliwe do selektywnych ligandów AT1 lub AT2. Poziomy specyficznego wiązania receptora [125I] -ANG II wykazywały cykliczne zmiany podczas cyklu menstruacyjnego, osiągając maksimum we wczesnym wydzielniczym błędzie śluzowym macicy, a następnie zmniejszając się w środkowym i późnym wydzielniczym błonie śluzowej macicy do poziomów obserwowanych we wczesnym i środkowym proliferacyjnym endometrium. Continue reading „Lokalizacja angiotensyny II i jej podtypu receptora podtypu w ludzkim endometrium oraz identyfikacja nowego miejsca wiązania angiotensyny o wysokim powinowactwie II.”