Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T ad 5

Przeciwnie, Smad2, drugi Smad, który ulega aktywacji przez receptor TGF-., był obecny na prawidłowych poziomach we wszystkich 20 próbkach (pokazano dla 6 próbek na Figurze 1A). Aby ocenić mechanizm leżący u podstaw utraty białka Smad3 w komórkach T ALL, wykorzystaliśmy RT-PCR do pomiaru poziomu mRNA Smad3 w próbkach od 8 z 10 dzieci. Mit RNA Smad3 był obecny we wszystkich ośmiu próbkach, a tożsamość tych produktów PCR została potwierdzona jako Smad3 za pomocą bezpośredniej sekwencji analizy DNA oczyszczonego z żelu (Figura 1C). Nie stwierdzono obniżenia poziomu mRNA Smad3 w próbkach ALL komórek T, w porównaniu z poziomami w prawidłowych komórkach T i w próbkach ANLL. Aby określić, czy utrata białka Smad3 była konsekwencją zmian w genie MADH3, który koduje Smad3, zsekwencjonowaliśmy wszystkie dziewięć eksonów genu, używając jako odniesienia genomowego DNA z normalnych komórek T. Nie znaleźliśmy dowodów delecji, mutacji punktowych ani innych zmian MADH3 w żadnej z próbek ALL komórek T. Przeprowadzono również analizę Western Blot Smad3 w próbkach od czterech osób dorosłych z białaczką limfocytową T związaną z HTLV-1 i trzema dorosłymi z zespołem Sézary ego. Białko Smad3 łatwo wykryto w pięciu z siedmiu próbek (Figura 1D).
Poziomy odpowiedzi Smad3 i komórek T na TGF-. u myszy
Figura 2. Figura 2. Haploinsuficiency of Smad3 w pośredniczeniu w hamujących efektach TGF-. na proliferację limfocytów T i produkcję interleukiny-2. W panelu A ekspresję Smad3 określono w lizatach komórek T z myszy Smad3 + / +, Smad3 +/- lub Smad3 – / – za pomocą Western blotting. Poziom Smad3 u myszy Smad3 +/- jest pośredni między myszami Smad3 + / + i Smad3 – / -. W panelu B utrata pojedynczego allelu Smad3 podwaja stężenie TGF-. wymagane do stłumienia proliferacji komórek T Smad3 +/- o 50 procent (IC50, wskazane strzałkami na osi x), mierzone przez inkorporację [3H] tymidyna. W panelu C ekspresja interleukiny-2 wzrasta w komórkach T myszy Smad3 +/- i Smad3 – / -. Splenocyty z każdego genotypu aktywowano anty-CD3.. Podstawowa produkcja interleukiny-2 przez wszystkie hodowane komórki T od myszy Smad3 – / – jest dwukrotnie większa niż w hodowanych komórkach T od myszy Smad3 + / +, z poziomami produkcji komórek T od myszy Smad3 +/- pośrednich między tymi dwoma. Poziom supresji interleukiny-2 przez TGF-. jest również skorelowany z dawką genu Smad3.
Powyższe dane sugerują, że poziom białka Smad3 eksprymowanego przez komórki T może być ważną determinantą w supresji leukemogenezy komórek T. Postawiliśmy hipotezę, że zmniejszenie Smad3 również pogarszałoby reakcję normalnych komórek T na TGF-.. Aby odpowiedzieć na to pytanie, zbadaliśmy zależność między poziomem Smad3 a supresją proliferacji limfocytów T i produkcją interleukiny 2 przez TGF-. u myszy, u których jeden lub oba allele genu Smad3 zostały unieczynnione przez rekombinację homologiczną.6 W eksperymencie porównano zdolność TGF-. do hamowania odpowiedzi proliferacyjnej i wytwarzania interleukiny 2 przez komórki T z myszy Smad3 + / +, Smad3 +/- i Smad3 – / -. Poziom białka Smad3 w limfocytach T od takich myszy był bezpośrednio skorelowany z dawką genu: poziomy u myszy Smad3 +/- były w przybliżeniu o połowę mniejsze niż u myszy Smad3 + / + (Figura 2A), a proliferacja komórek T Smad3 – / – była nie hamowane przez TGF-.1 (Figura 2B) .6 Stężenie TGF-. wymagane do supresji proliferacji komórek T z myszy Smad3 +/- o 50 procent (IC50) było dokładnie dwa razy większe niż IC50 wymagane dla komórek T typu dzikiego (tj. Rysunek 2B)
[hasła pokrewne: flexagen, dienogest, disulfiram ]
[podobne: teczowa kraina, oksyhemoglobina, solanka zabłocka ]