Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T ad 5

Przeciwnie, Smad2, drugi Smad, który ulega aktywacji przez receptor TGF-., był obecny na prawidłowych poziomach we wszystkich 20 próbkach (pokazano dla 6 próbek na Figurze 1A). Aby ocenić mechanizm leżący u podstaw utraty białka Smad3 w komórkach T ALL, wykorzystaliśmy RT-PCR do pomiaru poziomu mRNA Smad3 w próbkach od 8 z 10 dzieci. Mit RNA Smad3 był obecny we wszystkich ośmiu próbkach, a tożsamość tych produktów PCR została potwierdzona jako Smad3 za pomocą bezpośredniej sekwencji analizy DNA oczyszczonego z żelu (Figura 1C). Nie stwierdzono obniżenia poziomu mRNA Smad3 w próbkach ALL komórek T, w porównaniu z poziomami w prawidłowych komórkach T i w próbkach ANLL. Aby określić, czy utrata białka Smad3 była konsekwencją zmian w genie MADH3, który koduje Smad3, zsekwencjonowaliśmy wszystkie dziewięć eksonów genu, używając jako odniesienia genomowego DNA z normalnych komórek T. Continue reading „Utrata Smad3 w ostrej białaczce limfoblastycznej z limfocytów T ad 5”

Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie ad 5

Test sumy rang Wilcoxona i test t zostały użyte do identyfikacji genów, które ulegały zróżnicowanej ekspresji we wrażliwym i opornym ALL (p <0,001). Każda kolumna reprezentuje próbkę ALL oznaczoną według tego, czy była ona wrażliwa (zielona), czy odporna (czerwona) na dany lek, a każdy rząd reprezentuje zestaw sond. Mapy ciepła po lewej stronie rysunku wskazują wysoki (czerwony) lub niski (zielony) poziom ekspresji w stosunku do liczby standardowych odchyleń od średniej. W przypadku prednizolonu stwierdzono, że 42 zestawy sond rozróżniają oporne komórki białaczkowe od wrażliwych komórek białaczki (33 geny i 3 komplementarne klony DNA [cDNA]); dla winkrystyny zidentyfikowano 59 takich zestawów sond (40 genów i 14 klonów cDNA); dla asparaginaz zidentyfikowano 54 takie zestawy sond (35 genów i 10 klonów cDNA); a dla daunorubicyny zidentyfikowano 22 takie zestawy sond (20 genów i 2 klony cDNA). Trójwymiarowe wykresy po prawej stronie pokazują trzy główne składniki oparte na istotnych genach odróżniających dla każdego leku. Continue reading „Wzorce ekspresji genów w opornych na leki komórkach ostrej białaczki limfoblastycznej i odpowiedź na leczenie ad 5”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli czesc 4

Transfekcję prowadzono przy użyciu .g DNA na mililitr i Tfx50 (stosunek 1: 2 do 1: 4) przez jedną godzinę w pożywce bez surowicy. Pięć procent surowicy płodowej cielęcej dodano następnie do pożywki na 24 godziny przed wykonaniem mikroskopii konfokalnej żywych komórek (model LSM 510, Zeiss). Długość fali wzbudzenia laserowego wynosiła 488 nm; fluorescencję wykrywano pomiędzy 505 i 550 nm przy użyciu otworu otworkowego o wielkości 106 .m. Autofluorescencja nie została wykryta między 560 a 615 nm przy użyciu długości fali 543 nm. Wyciągi jądrowe i cytosolowe oraz test przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej
Wyciągi jądrowe i cytosolowe przygotowano z hodowli, które były w 80% konfluentne, jak opisano poprzednio.25 Komórki mięśni gładkich oskrzeli zeskrobano z kolb 175 cm i wirowano przy 5000 x g przez 2 minuty w 4 ° C, i osad ponownie zawieszono. Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli czesc 4”

Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 11

Analiza metodą Western blot koimmunoprecypitatów wykazała wyraźne pasmo dla C / EBP., gdy stosowano przeciwciało przeciwko receptorowi glukokortykoidowemu do immunoprecypitacji i dla receptora glukokortykoidowego, gdy użyto przeciwciała przeciw C / EBP-.. Przeciwnie, nietransfekowane komórki mięśni gładkich oskrzeli u osobników z astmą nie wykazały żadnego sygnału ani dla C / EBP., ani dla receptora glukokortykoidowego. Jednakże, gdy te komórki mięśni gładkich oskrzeli transfekowano ludzkim wektorem ekspresyjnym C / EBP. 48 godzin przed stymulacją budezonidem i ekstrakty jądrowe przygotowano 3 godziny po dodaniu leku, a następnie koimmunoprecypitacji, obserwowaliśmy pasmo dla C / EBP. gdy użyto przeciwciała przeciw receptorowi glukokortykoidowemu, a także pasma dla receptora, gdy użyto przeciwciała przeciw C / EBP. Continue reading „Dysfunkcyjne oddziaływanie C / EBP i receptora glukokortykoidów w komórkach mięśni gładkich oskrzeli ad 11”

Wapń i cykliczny monofosforan adenozyny jako drugi przekaźnik wazopresyny w wewnętrznym rdzeniowym kanale zbierającym szczura.

Wazopresyna zwiększa zarówno przepuszczalność mocznika, jak i przepuszczalność wody osmotycznej w końcowej części kanału szpikowego wewnątrz jamy szpikowej (terminal IMCD). Aby zidentyfikować drugich przekaźników pośredniczących w tych odpowiedziach, zmierzono przepuszczalność mocznika, przepuszczalność wody osmotycznej, wewnątrzkomórkowe stężenie wapnia i cykliczną akumulację AMP w izolowanych końcowych IMCD. Po dodaniu wazopresyny wystąpił przemijający wzrost wewnątrzkomórkowego wapnia, który był zbieżny ze wzrostem akumulacji cyklicznego AMP i przepuszczalności mocznika. Połowicznie maksymalne zwiększenie przepuszczalności mocznika i przepuszczalności wody osmotycznej nastąpiło przy 0,01 nM wazopresyny. Stężenie progowe dla mierzalnego wzrostu akumulacji cyklicznego AMP wynosiło około 0,01 nM, podczas gdy mierzalne zwiększenie wewnątrzkomórkowego wapnia wymagało znacznie wyższych stężeń wazopresyny (większych niż 0,1 nM). Continue reading „Wapń i cykliczny monofosforan adenozyny jako drugi przekaźnik wazopresyny w wewnętrznym rdzeniowym kanale zbierającym szczura.”

Metabolizm kwasu metylomalonowego u szczurów. Czy metylmalonylo-koenzym jest niedoborem racemazy u człowieka

U szczurów z niedoborem witaminy B12 i szczurów normalnych stosowano metylomalonowe (MMA) i etylomalonowe kwasy znakowane 13C w grupach karboksylowych i 2H w grupach alkilowych. Znaczące frakcje podawanych kwasów były wydalane zarówno u pacjentów z niedoborem witaminy B12, jak i u zdrowych zwierząt, po przejściu ich obu znakowanych 13C grup karboksylowych z endogennymi 12C. Wymiana alfa-1H MMA w 2H2O w 25 ° C i pH 7,5 została znaleziona przez magnetyczny rezonans jądrowy 1H, aby okres półtrwania wynosił 28,3 minuty. Wyniki te pokazują, że część metabolizmu in vivo przez szlak propionianu do bursztynianu zachodzi poprzez bocznik zawierający wolną MMA. Uważa się, że enzymy tego szlaku wykorzystują tylko estry koenzymu A (CoA). Continue reading „Metabolizm kwasu metylomalonowego u szczurów. Czy metylmalonylo-koenzym jest niedoborem racemazy u człowieka”

Charakter i specyfika odpowiedzi immunologicznej na kolagen w indukowanym kolagenem zapaleniu stawów typu II u myszy.

W celu określenia roli odporności kolagenowej w rozwoju indukowanego kolagenem zapalenia stawów myszy DBA / immunizowano kolagenem typu II i obserwowano pod kątem rozwoju zapalenia wielostawowego. 96% myszy immunizowanych rodzimym kolagenem typu II rozwinęło zapalne zapalenie stawów pomiędzy 4 a 5 wk po pierwszej immunizacji. Immunizacja zdenaturowanym kolagenem typu II w dokładnie taki sam sposób nie była skuteczna w wywoływaniu zapalenia stawów. Odporność na komórkę u myszy z zapaleniem stawów oceniano przez pomiar inkorporacji [3H] tymidyny przez komórki jednojądrzaste hodowane w obecności kolagenu. Maksymalna odpowiedź proliferacyjna na kolagen wystąpiła po 2 tyg. Continue reading „Charakter i specyfika odpowiedzi immunologicznej na kolagen w indukowanym kolagenem zapaleniu stawów typu II u myszy.”

Niedobór aktywnych komórek naturalnych zabójców w zespole Chediak-Higashi. Umiejscowienie defektu za pomocą testu cytotoksyczności pojedynczej komórki.

W toku badań zbadano wadliwą aktywność komórek NK (NK) u dwóch pacjentów z zespołem Chediak-Higashi (CHS) przy użyciu standardowej mikrocytoksyczności uwalniania 51-chromu i testu z pojedynczą komórką w agarozie przeciwko komórkom docelowym K562 i Molt-4 . Pacjenci z CHS wykazywali niedostateczną ogólną maksymalną pojemność NK, ale mieli prawidłową zawartość procentową potencjalnie cytotoksycznych docelowych komórek wiążących. względna liczba TBC, która może zabijać związane cele (tj. aktywne komórki NK) była istotnie obniżona u pacjentów z CHS w porównaniu z normalnymi kontrolami. Zmniejszone aktywne komórki NK CHS, które były obecne, były jednak zdolne do recyklingu i poddawania lizie wielu komórek docelowych podczas okresu testowego. Continue reading „Niedobór aktywnych komórek naturalnych zabójców w zespole Chediak-Higashi. Umiejscowienie defektu za pomocą testu cytotoksyczności pojedynczej komórki.”

Izolacja krążących kompleksów immunologicznych z wykorzystaniem komórek Raji. Separacja antygenów z kompleksów immunologicznych i wytwarzanie antyserum.

Komórki Raji wykorzystano do izolacji kompleksów antygen-przeciwciało wiążące kompleks z surowicy. Kompleksy immunologiczne związane z tymi komórkami znakowano radioaktywnie na powierzchni komórek za pomocą laktoperoksydazy. Kompleksy następnie eluowano z komórek izotonicznym buforem cytrynianowym o pH 3,2 lub odzyskiwano przez immunoprecypitację lizatów komórkowych. Antygen i fragmenty przeciwciał kompleksów izolowano przez dysocjację wirowania w gradiencie gęstości sacharozy lub przez elektroforezę w żelu z dodecylosiarczanem sodu / poliakryloamidem. Różnorodność preformowanych kompleksów immunologicznych została skutecznie wyizolowana z surowicy przy użyciu tego podejścia. Continue reading „Izolacja krążących kompleksów immunologicznych z wykorzystaniem komórek Raji. Separacja antygenów z kompleksów immunologicznych i wytwarzanie antyserum.”

Transport kwasów alfa-aminoizomasłowych w ludzkich limfocytach białaczkowych: charakterystyka in vitro i hamowanie kortyzolem i cykloheksymidem

Badaliśmy transport kwasu alfa-aminoizomasłowego (AIB) -3-14C i jego odpowiedź na kortyzol i cykloheksimid in vitro w limfocytach krwi od nieleczonych pacjentów z przewlekłą białaczką limfocytową. Nagromadzenie AIB-3-14C wzrastało liniowo przez 60 min i osiągnęło pozorny stan ustalony po 120 minutach. Początkowa szybkość akumulacji AIB (Vo) wahała się od 1,1 do 10,2. Moli / kg H2O komórki na minutę w komórkach od 16 różnych pacjentów; jednak Vo był powtarzalny w komórkach od pięciu z sześciu pacjentów, które były badane wielokrotnie w ciągu 1-9 miesięcy, i dodatnio korelował z liczbą limfocytów (r = 0,51, P = <0,01). Stwierdzono, że praktycznie całkowite zahamowanie syntezy białka cykloheksimidem zmniejsza akumulację AIB w komórkach od czterech pacjentów, którzy mieli wysoki wskaźnik transportu AIB, ale nie mieli wpływu na transport w komórkach od czterech pacjentów, którzy akumulowali AIB wolniej. Continue reading „Transport kwasów alfa-aminoizomasłowych w ludzkich limfocytach białaczkowych: charakterystyka in vitro i hamowanie kortyzolem i cykloheksymidem”